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미생물학 transformation 형질전환 실험 레포트2025.01.031. Transformation 실험을 통해 plasmid DNA를 competent cell에 도입하여 colony를 관찰함으로써 transformation 과정을 이해할 수 있었다. competent cell은 온도와 충격에 민감하므로 실험 시 주의해서 다뤄야 하며, 배지에 spreading 시 배지가 파이지 않도록 조심해서 다뤄야 한다. 또한 암피실린에 저항성을 가지는 유전자가 competent cell에는 없어서 암피실린이 포함된 배지에서 살아남을 수 없지만, 제대로 transformation이 일어난 세포는 암피실린이 포함...2025.01.03
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A+ 생화학실험 <5주차. Transformation> 레포트2025.01.201. Competent cell (DH5α) DH5α는 recA1 유전자의 160번 아미노산이 glycine에서 aspartic acid로 변이되는 돌연변이로 인하여 endonuclease의 기능을 상실하고 재조합 효소의 활성을 억제되었다. 이에 삽입된 plasmid DNA가 세포 내에서 안정적으로 유지되고 분해되지 않도록 하여, 높은 transformation efficiency(1×10^8 cfu/μg)를 가진다. 2. Plasmid DNA Plasmid DNA는 박테리아의 chromosomal DNA와 물리적으로 분리되어 있으...2025.01.20
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DNA Ligation & Transformation, Mini-scale preparation of plasmid DNA Restriction enzyme & Gel electrophoresis2025.01.181. DNA Ligation & Transformation 제한효소를 처리하여 얻어낸 insert DNA를 T4 DNA ligase를 이용하여 vector에 삽입한다. DNA strand의 5'에 존재하는 인산기와 3'에 존재하는 OH기 사이에 phosphodiester bond를 형성하여 ligation하고, ligation product를 competent cell에 형질전환한 다음 plate에 ampicillin resistance에 의해 생성된 colony를 selection한다. 2. Mini-scale preparatio...2025.01.18
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Plasmid purification & DNA 정량 A+ report2025.01.171. Plasmid DNA transformation Plasmid DNA transformation이란 특정 종의 세포에 외부 유전자를 도입하여 그 세포가 새로운 유전자 정보를 표현하도록 하는 과정이다. 간단히 말해, ligation된 plasmid를 숙주세포 안으로 넣어주는 것이다. 일반적으로, plasmid는 작은 원형 DNA 조각으로서 bacteria와 같은 원핵생물의 세포외부에서도 독립적으로 복제할 수 있는 DNA이다. 특정 유전자 조각을 plasmid에 삽입한 후, host cell에 도입해서 해당 유전자가 host ce...2025.01.17
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DNA cloning 방법/enzyme, transformation, selection mark/생화학 보고서2025.01.201. DNA cloning 방법 DNA cloning은 타깃 유전자를 박테리아의 게놈에서 잘라내어 plasmid에 삽입하는 과정입니다. 이 과정에서 restriction enzyme을 사용하여 유전자를 자르고, ligase를 사용하여 유전자를 plasmid에 붙입니다. 이렇게 만들어진 recombinant vector는 박테리아에 형질전환되어 증폭됩니다. 형질전환 과정에서는 열처리를 통해 세포막을 열어 plasmid가 들어가게 하며, 항생제 내성 유전자를 선별 마커로 사용하여 형질전환된 세포를 선별합니다. 2. Enzyme 사용 D...2025.01.20
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[서강대학교 현대생물학실험2] (2차 풀레포트) TA cloning & transformation, mini-prep, Enzyme cut, electrophoresis2025.01.221. TA cloning TA cloning을 통해 insert를 삽입한 vector는 transformation을 이용해 세포에 주입하여 lacZ selection으로 insert 삽입 여부를 확인할 수 있다. lacZ operon이 작동하면 β-1, 4-linkage를 분해 시킬 수 있는 β-galactosidase가 생성된다. X-gal(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-D-galactopyranoside)은 β-1, 4 linkage를 가지고 있으며 이 linkage가 분해되면 파란색을 띠게 된다. 2. Tra...2025.01.22
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생화학 실험 보고서 - 박테리아 형질전환2025.01.271. 박테리아 형질전환 이번 실험에서는 화학적 방법을 사용하여 박테리아 세포에 재조합 DNA를 도입하는 형질전환 실험을 수행하였다. 실험에 사용된 competent cell은 CaCl2와 glycerol 처리를 통해 세포막의 투과성을 높여 DNA 도입을 용이하게 하였다. 또한 heat shock 과정을 거쳐 세포막의 유동성을 증가시켰다. 형질전환 효율은 colony 수를 통해 계산하였으며, 실험 결과와 고찰을 통해 competent cell 농도와 희석 과정이 형질전환 효율에 영향을 미치는 것을 확인하였다. 1. 박테리아 형질전환 ...2025.01.27
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Purification of Plasmid DNA by Mini-prep2025.01.211. Plasmid DNA Plasmid DNA는 bacterial cell의 소기관으로서 transformation 등 다양한 곳에 사용된다. Plasmid DNA는 host cell 당 적게는 1~3개, 많게는 수십 개까지 복제되기도 한다. Plasmid DNA 또한 유전자를 지녔기에 transformation을 일으킬 수 있으며, vector로서 사용되기도 한다. 2. Plasmid DNA Purification Mini-prep은 bacteria로부터 plasmid DNA만을 정제하는 실험법이다. 수확한 bacteria에 다...2025.01.21
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DNA ligation, Transformation, Mini-scale preparation of plasmid DNA2025.01.221. DNA ligation DNA ligation은 T4 DNA ligase 효소를 이용하여 DNA 말단을 phosphodiester 결합으로 연결하는 과정이다. 이 과정에서 vector와 insert의 ligation, vector의 self-ligation, insert의 self-ligation 등 세 가지 형태가 나타날 수 있다. 본 실험에서는 HindⅢ와 NdeⅠ로 double-digestion한 vector와 insert를 T4 DNA ligase로 ligation하였다. 2. Transformation ligation...2025.01.22