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[유전학] DNA sequencing, vector의 제작, NGS2025.05.031. DNA sequencing DNA는 단백질을 암호화 하고있는 물질로 A,T,G,C라는 기본 단위로 이루어진다. 어떤 서열을 갖고 있는 지에 따라 결과적으로 생산되는 단백질이 달라지게 되는데 이 서열을 확인하는 것은 분자생물학에 있어서 큰 의미가 있다. DNA sequencing은 그 DNA 서열을 확인하는 방법이다. 과거에는 그 방법으로 sanger method를 사용했지만 현재는 더욱 빠르고 신속하게 원하는 DNA서열을 확인할 수 있는 방법인 NGS를 통해 염기서열을 확인한다. 2. Vector 제작 우리는 DNA 재조합 기...2025.05.03
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Site-directed mutagenesis, DNA sequencing2025.01.221. GFP (green fluorescent protein) GFP는 Aequorea victoria로부터 추출한 형광 단백질로, 빛을 흡수하여 형광을 발광한다. GFP는 11개의 β-sheet가 β-barrel 구조를 이루고 있으며, barrel 내의 chromophore가 빛을 흡수하여 전자를 excitation시키고 바닥 상태로 돌아가면서 형광을 방출한다. GFPuv는 GFP의 variant 중 하나로, UV(ultra violet)을 흡수하여 형광을 방출한다. 2. Site-directed mutagenesis Site-d...2025.01.22
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11주차_sequencing BL21 transformation2025.05.141. Sanger sequencing Sanger sequencing은 Frederick Sanger에 의해 1977년 개발된 방법으로, 500bp 이하의 DNA 서열을 결정할 때 99.99%의 매우 높은 정확도를 보인다. 이 방법은 DNA polymerase에 의한 DNA 중합 과정 중 template DNA 서열과 상보적인 염기가 결합된다는 성질을 이용하기 때문에 chain termination method 또는 dideoxynucleotide termination method라고 부르기도 한다. Sanger sequencing...2025.05.14
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Site-directed mutagenesis & DNA sequencing2025.01.181. Site-directed mutagenesis Site-directed mutagenesis는 원하는 돌연변이를 포함하는 짧은 DNA primers를 사용하여 DNA 염기서열 특정 위치의 mutation을 일으켜 돌연변이를 얻는 방법입니다. 이 방법을 이용하여 GFP의 chromophore 아미노산 서열을 변경하여 다양한 색상의 형광 단백질을 만들 수 있습니다. 2. DNA sequencing DNA sequencing은 DNA를 구성하는 염기 순서를 결정하는 작업입니다. Sanger sequencing 방법은 dNTP와 dd...2025.01.18