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Plasmid DNA 정제2025.01.131. 대장균(E. coli) 대장균(E.coli)은 Theodor Esherich의 이름을 따서 발견되어 명명된 박테리아이다. 특징으로는 그람음성의 간균이며, 포자 생성을 하지 않으며, 1-2 microns x 30-30 micron (1 micron = 0.001 mm)크기이고, 섭씨 37도에서 쉽게 자랄 수 있다. 2. Plasmid DNA Plasmid DNA란 세균 속에 주 DNA와 별도로 존재하면서 증식할 수 있는 고리 형태의 DNA로, 원핵생물과 효모 등에서 발견된다. 대장균 세포에서 분리된 Plasmid DNA는 sup...2025.01.13
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인천대학교 나노바이오실험(1) A 자료) 5. Restriction Enzyme Cutting2025.01.041. Restriction Enzyme Cutting 이번 실험은 지난 실험에서 E.coli 배양액에서 Alkaimen Lysis mothod으로 추출한 plasmid DNA를 restriction enzyme을 사용하여 절단하였다. 그리고 gel electrophoresis를 통해, 절단된 plasma DNA를 확인하는 것을 목표로 하였다. 실험 결과, 5,000~6,000 bp의 band와 700~1,000 bp의 bnad로 2개의 주요한 DNA band를 관찰할 수 있었다. 추가로, gel 아랫부분에 몇 개의 DNA band가...2025.01.04
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제한효소와 아가로즈젤 전기영동/ Restriction Digest and Agarose Gel Electrophoresis2025.01.121. Plasmid DNA Plasmid DNA는 재조합 DNA 조작을 위한 운반체 DNA로 사용되며, 대장균에 vector를 삽입하는 과정을 Bacterial Transformation이라고 한다. 대장균 cell에는 plasmid DNA와 대장균 cell의 염색체 DNA인 chromosomal DNA가 독자적으로 존재하기 때문에 plasmid DNA를 따로 분리하는 과정을 Purification of plasmid DNA라고 한다. 일반적으로 Restriction enzymes를 처리하지 않은 plasmid DNA의 경우 ope...2025.01.12
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Plasmid DNA miniprep2025.05.141. Plasmid DNA Plasmid DNA는 bacteria에 존재하는 extrachromosomal DNA로, 자체적으로 복제 가능한 복제기점을 갖고 있다. Plasmid DNA는 genomic DNA와 달리 생존에 필수적이지 않은 정보를 포함하고 있으며, 이를 이용하여 유전자 발현 여부를 조사할 수 있다. Plasmid DNA는 supercoiled DNA 형태를 가지고 있어 유전자 분리, 조작, cloning 등 유전공학에 활용되기 쉽다. 2. Plasmid DNA extraction Plasmid DNA를 활용하기 위해...2025.05.14
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[A]서강대학교 현대생물학실험2_2차 풀레포트_TA Cloning과 Mini-Prep, Restriction enzyme & Gel electrophoresis2025.01.181. TA Cloning TA Cloning은 PCR을 거친 product의 3'에 존재하는 A overhang과 T vector의 3'의 T overhang의 상보성으로 인해 cloning을 진행하는 기법이다. Lac Z selection을 통해 blue colony와 white colony를 확인하여 insert DNA가 정상적으로 삽입되었는지 확인할 수 있다. Self-ligation을 줄이기 위해 alkaline phosphatase 처리나 T-overhang cloning protocol 수정 등의 방법을 사용할 수 있다....2025.01.18
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DNA Ligation & Transformation, Mini-scale preparation of plasmid DNA Restriction enzyme & Gel electrophoresis2025.01.181. DNA Ligation & Transformation 제한효소를 처리하여 얻어낸 insert DNA를 T4 DNA ligase를 이용하여 vector에 삽입한다. DNA strand의 5'에 존재하는 인산기와 3'에 존재하는 OH기 사이에 phosphodiester bond를 형성하여 ligation하고, ligation product를 competent cell에 형질전환한 다음 plate에 ampicillin resistance에 의해 생성된 colony를 selection한다. 2. Mini-scale preparatio...2025.01.18
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Plasmid DNA 분리 결과 레포트2025.04.261. Plasmid DNA 분리 이 실험에서는 박테리아에서 Plasmid DNA를 분리하는 과정을 수행했습니다. 박테리아 배양액에서 박테리아를 추출하고, mini prep 방법을 통해 세포벽과 세포막을 부수어 Plasmid DNA만 분리했습니다. 그 후 1% Agarose Gel에 Sample Loading하고 전기영동을 통해 DNA 밴드를 확인했습니다. 하지만 실험 결과 DNA가 추출되지 않아 DNA Ladder와 비교할 수 없었습니다. 이는 실험 과정에서 약간의 차이로 인해 오차가 발생했거나 실험 진행이 미숙했기 때문으로 분석됩...2025.04.26
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[서강대학교 현대생물학실험2] (2차 풀레포트) TA cloning & transformation, mini-prep, Enzyme cut, electrophoresis2025.01.221. TA cloning TA cloning을 통해 insert를 삽입한 vector는 transformation을 이용해 세포에 주입하여 lacZ selection으로 insert 삽입 여부를 확인할 수 있다. lacZ operon이 작동하면 β-1, 4-linkage를 분해 시킬 수 있는 β-galactosidase가 생성된다. X-gal(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-D-galactopyranoside)은 β-1, 4 linkage를 가지고 있으며 이 linkage가 분해되면 파란색을 띠게 된다. 2. Tra...2025.01.22
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DNA ligation, Transformation, Mini-scale preparation of plasmid DNA2025.01.221. DNA ligation DNA ligation은 T4 DNA ligase 효소를 이용하여 DNA 말단을 phosphodiester 결합으로 연결하는 과정이다. 이 과정에서 vector와 insert의 ligation, vector의 self-ligation, insert의 self-ligation 등 세 가지 형태가 나타날 수 있다. 본 실험에서는 HindⅢ와 NdeⅠ로 double-digestion한 vector와 insert를 T4 DNA ligase로 ligation하였다. 2. Transformation ligation...2025.01.22
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Plasmid purification & DNA 정량 A+ report2025.01.171. Plasmid DNA transformation Plasmid DNA transformation이란 특정 종의 세포에 외부 유전자를 도입하여 그 세포가 새로운 유전자 정보를 표현하도록 하는 과정이다. 간단히 말해, ligation된 plasmid를 숙주세포 안으로 넣어주는 것이다. 일반적으로, plasmid는 작은 원형 DNA 조각으로서 bacteria와 같은 원핵생물의 세포외부에서도 독립적으로 복제할 수 있는 DNA이다. 특정 유전자 조각을 plasmid에 삽입한 후, host cell에 도입해서 해당 유전자가 host ce...2025.01.17
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