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A+ 생화학실험 <5주차. Transformation> 레포트2025.01.201. Competent cell (DH5α) DH5α는 recA1 유전자의 160번 아미노산이 glycine에서 aspartic acid로 변이되는 돌연변이로 인하여 endonuclease의 기능을 상실하고 재조합 효소의 활성을 억제되었다. 이에 삽입된 plasmid DNA가 세포 내에서 안정적으로 유지되고 분해되지 않도록 하여, 높은 transformation efficiency(1×10^8 cfu/μg)를 가진다. 2. Plasmid DNA Plasmid DNA는 박테리아의 chromosomal DNA와 물리적으로 분리되어 있으...2025.01.20
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미생물학 transformation 형질전환 실험 레포트2025.01.031. Transformation 실험을 통해 plasmid DNA를 competent cell에 도입하여 colony를 관찰함으로써 transformation 과정을 이해할 수 있었다. competent cell은 온도와 충격에 민감하므로 실험 시 주의해서 다뤄야 하며, 배지에 spreading 시 배지가 파이지 않도록 조심해서 다뤄야 한다. 또한 암피실린에 저항성을 가지는 유전자가 competent cell에는 없어서 암피실린이 포함된 배지에서 살아남을 수 없지만, 제대로 transformation이 일어난 세포는 암피실린이 포함...2025.01.03
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대장균 배양, 형질전환, Plasmid DNA 분리, DNA 전기영동 실험 보고서2025.01.121. 대장균(E.coli) 대장균(E.coli)은 그람음성 간균으로, 포자를 생성하지 않으며 1-2 microns x 30-30 micron 크기의 박테리아입니다. 섭씨 37도에서 잘 자라며, 정상적인 인간의 장에 존재하여 건강에 유익합니다. 하지만 배설물과 함께 나와 질병을 일으킬 수 있습니다. 2. 배지 배지는 미생물이나 세포를 성장시키는데 사용됩니다. 가장 일반적인 배지는 액체 영양배지나 LB배지이며, 이를 Agar와 섞어 고체배지로 사용할 수 있습니다. 이번 실험에서 사용한 LB배지는 tryptone, yeast extrac...2025.01.12
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[일반생물학실험] Plasmid DNA - 전기영동2025.01.031. DNA 전기영동 DNA 전기영동은 DNA를 크기에 따라 분리하는 기술입니다. DNA는 인산기를 가지고 있어 전기영동 완충용액에서 음전하를 띠게 되며, 전류를 흘려주면 양극 쪽으로 이동하게 됩니다. DNA 분자량이 클수록, agarose 농도가 높을수록, 전압이 낮을수록 이동속도가 느려집니다. 또한 DNA 구조에 따라서도 이동속도가 달라집니다. 전기영동 후 ethidium bromide로 염색하면 UV 조사 시 형광을 발하여 DNA를 확인할 수 있습니다. 1. DNA 전기영동 DNA 전기영동은 생명과학 분야에서 매우 중요한 기술...2025.01.03
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A+ 생화학실험 <6주차. Plasmid DNA Miniprep> 레포트2025.01.201. Plasmid DNA Plasmid DNA는 박테리아 내에 존재하는 extrachromosomal DNA로, 자체적 복제가 가능한 복제 기점을 가지고 있습니다. 생존에 필수적이지 않은 정보를 담고 있으며, 항생제 내성 유전자 같은 선택적 마커가 포함되기도 합니다. 이를 통해 항생제가 포함된 배지에서 cell-selection을 진행할 수 있으며, 이로부터 유전자 발현 여부를 조사할 수 있습니다. 또한 plasmid DNA는 super coiled 형태의 DNA로, 유전자 조작, 분리, cloning 등 유전공학 분야에 용이하게...2025.01.20
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Purification of Plasmid DNA by Mini-prep2025.01.211. Plasmid DNA Plasmid DNA는 bacterial cell의 소기관으로서 transformation 등 다양한 곳에 사용된다. Plasmid DNA는 host cell 당 적게는 1~3개, 많게는 수십 개까지 복제되기도 한다. Plasmid DNA 또한 유전자를 지녔기에 transformation을 일으킬 수 있으며, vector로서 사용되기도 한다. 2. Plasmid DNA Purification Mini-prep은 bacteria로부터 plasmid DNA만을 정제하는 실험법이다. 수확한 bacteria에 다...2025.01.21
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[만점보고서]Plasmid DNA 추출과 DNA 정량 실험보고서2025.01.171. Plasmid DNA 추출 Plasmid DNA는 세균의 세포 내에서 염색체와 별개로 존재하는 자가복제 DNA이다. Plasmid DNA 추출을 위해 Alkaline Lysis 법을 사용하여 세포를 용해시키고 plasmid DNA를 염색체 DNA와 분리한다. 이 과정에서 다양한 buffer를 사용하여 pH 변화를 조절하고 불순물을 제거한다. 2. DNA 정량 Nanodrop 분광광도계를 이용하여 추출한 plasmid DNA의 농도와 순도를 측정한다. 260nm 흡광도로 DNA 농도를 측정하고, 260nm/280nm 및 260n...2025.01.17
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Restriction Enzyme Digestion and Gel Electrophoresis 레포트2025.01.211. Plasmid DNA와 Vector Plasmid DNA는 박테리아 세포 내에 염색체와 별도로 존재하면서 독자적으로 복제, 증식할 수 있는 원형 DNA 분자를 말한다. Plasmid Vector는 원하는 특정 유전자를 운반할 수 있고, 한 세대의 박테리아로부터 다음 세대로 전달되기 때문에, DNA 클로닝을 위한 핵심적인 도구이다. Vector에는 restriction enzyme이 작용하는 multicloning site과, 클로닝이 이루어진 후 많은 박테리아 중에서 vector를 가지고 있는 박테리아만 분리할 수 있도록 하는...2025.01.21
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제한효소 처리 DNA 전기영동 보고서2025.05.051. 제한효소 제한효소는 세균이 가지고 있는 DNA를 자르는 효소이다. 외부 바이러스의 DNA를 절단하여 자기를 보호하기 위한 수단으로 사용된다. 제한효소는 그 종류마다 4개 또는 6개의 염기서열을 인식하여 DNA를 절단하며, 이러한 특징 때문에 DNA 클로닝 등에 사용되고 있다. 2. 전기영동 전기영동은 전기장의 영향으로 전하를 띄는 물질이 유동성 매체에서 이동하는 원리를 이용한 기술이다. DNA는 음의 전하를 띄고 있기 때문에 전기를 걸어주면 양전하 쪽으로 이동하게 된다. DNA 가닥의 길이에 따라 이동 속도가 달라지므로, 이를...2025.05.05
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