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Western blot 보고서2025.05.071. Western blot Western blot은 특정 단백질을 검출하는 기법으로, 단백질 혼합물을 전기영동으로 분리하고 membrane에 옮긴 후 항원-항체 반응을 이용하여 목표 단백질을 찾아내는 방법이다. 이 과정에는 샘플 준비, 전기영동, blotting, 검출 등의 단계가 포함된다. 2. 단백질 분리 단백질 혼합물은 SDS-PAGE를 통해 크기에 따라 분리된다. SDS는 단백질의 이차, 삼차 구조를 풀어 단백질이 분자량에 따라 이동할 수 있게 한다. 전기영동 후 단백질은 membrane으로 옮겨진다. 3. 항원-항체 반응...2025.05.07
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완충용액과 산성도 (생화학실험)2025.01.161. 완충용액 완충용액은 일반적으로 산이나 염기를 가해도 수소 이온 농도(pH)가 크게 변하지 않는 용액을 말한다. 이번 실험에서는 아세트산과 아세트산 나트륨을 섞어 만든 완충용액의 특성을 확인하였다. 완충용액은 약산과 그 짝염기를 동일한 농도로 섞어서 제조할 수 있으며, 산을 넣으면 정반응에 의해 염기가 생기고 염기를 넣으면 역반응에 의해 산이 생기면서 수소 이온 농도의 변화가 완충되는 메커니즘을 가지고 있다. 2. pH pH는 수소 이온 농도 지수를 의미하며, 화학에서 물질의 산과 염기의 강도를 나타내는 척도로 사용된다. 중성 ...2025.01.16
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TRIS 완충용액 제작 방법 및 특징2025.01.141. 완충용액 완충용액은 화학적으로 안정적인 pH 값을 유지하는 용액으로, 화학 실험, 생물학 연구, 의학 등 다양한 분야에서 중요한 역할을 한다. 완충용액은 주로 약한 산과 그 상응염기 조합으로 만들어지며, pH를 상대적으로 안정적으로 유지할 수 있게 한다. 2. Tris 완충용액 Tris 완충용액은 트리스(트리스아민)와 트리스염(트리스하이드록시메틸아미노메탄)을 혼합하여 만든 완충용액으로, pH 7.0에서 9.0까지의 범위에서 안정성을 유지할 수 있다. 트리스의 약한 산성 특성과 염기 특성을 활용하여 산과 염기의 중화 반응을 통해...2025.01.14
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A+ 생화학실험 <2주차. Pipetting & 50X TAE buffer preparation> 레포트2025.01.201. Pipetting Pipet은 액체의 부피를 정확하게 측정하고, 이동하기 위해 사용하는 실험 기구이다. 일반적으로 pipet은 대기압과 실험자가 조작하는 압력의 차이를 활용한다. 실험자가 pipet의 상단을 조작하여 내부 압력을 조절함으로써, 액체가 pipet 내부로 들어오거나 나가게 된다. Pipet에는 다양한 유형과 용량이 있으며, 사용 목적에 맞게 선택할 수 있다. Pasteur pipet, Graduated pipet, Volumetric pipet, Micropipette 등이 있으며, 각각의 특징과 용도가 다르다. ...2025.01.20
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이화여대 생명과학실험 A+ 리포트(DNA plasmid transfection, Immunoprecipitation)2025.01.231. DNA plasmid transfection DNA plasmid transfection 실험의 목적은 고분자-유전자 복합체를 이용하여 동물 세포에 plasmid DNA를 넣어 세포의 형질을 전환하는 것이다. 이를 위해 먼저 단백질 A에 대한 염기서열 옆에 epitope tag인 V5 폴리펩타이드에 대한 염기서열을 같이 붙여서 플라스미드 DNA를 세포 내에 넣어준다. 그러면 플라스미드가 핵내에 들어가서 DNA 역할을 할 수 있고, 이후 벡터 DNA가 mRNA로 전사되어 V5가 붙은 단백질 A가 발현된다. 2. Immunopre...2025.01.23
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단백질의 분리2025.01.231. 단백질 분리 실험을 통해 원심분리를 이용하여 세포 내 단백질을 분리하는 방법을 익혔다. 단백질 분리를 위해 세포를 깨고 RIPA 버퍼에 녹인 후 원심분리하여 상층액을 얻었다. 이 상층액에는 세포에서 추출된 단백질이 포함되어 있다. 2. SDS-PAGE SDS-PAGE는 단백질의 크기에 따라 분리하는 기법으로, 단백질이 SDS에 의해 변성되어 전하/분자량 비율이 동일해지면 전기장 내에서 크기에 따라 이동속도가 달라져 분리된다. 이를 통해 단백질의 분자량을 확인할 수 있다. 3. 세포 용해 세포를 깨는 방법에는 homogeniza...2025.01.23
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[생화학실험] A+, 동물세포 배양 및 세포계수2025.01.031. 효소 반응 및 활성 이 실험에서는 효소인 트립신을 이용하여 우유의 주요 단백질인 카제인을 분해하는 과정을 관찰하였다. 온도에 따른 트립신의 활성을 확인하였는데, 0°C에서는 거의 활성이 없었고 37°C와 65°C에서는 카제인이 분해되어 우유의 투명도가 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 이를 통해 효소 반응에 영향을 미치는 요인 중 온도의 중요성을 알 수 있었다. 2. 단백질 분해 효소 이번 실험에서 사용된 트립신은 단백질을 펩티드로 가수분해하는 효소이다. 트립신은 아르기닌, 리신 등의 C말단 펩티드 결합을 절단하는 엔도펩티다아...2025.01.03
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[만점 레포트] 연세대학교 생화학실험(1) 4주차 gel filteration chromatography2025.05.041. Gel Filtration Chromatography Gel filtration chromatography is a technique used to separate molecules based on their size and shape. It involves passing a sample through a column packed with porous beads, where larger molecules elute first and smaller molecules elute later. The technique is usefu...2025.05.04
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A+ 생화학실험 <5주차. Transformation> 레포트2025.01.201. Competent cell (DH5α) DH5α는 recA1 유전자의 160번 아미노산이 glycine에서 aspartic acid로 변이되는 돌연변이로 인하여 endonuclease의 기능을 상실하고 재조합 효소의 활성을 억제되었다. 이에 삽입된 plasmid DNA가 세포 내에서 안정적으로 유지되고 분해되지 않도록 하여, 높은 transformation efficiency(1×10^8 cfu/μg)를 가진다. 2. Plasmid DNA Plasmid DNA는 박테리아의 chromosomal DNA와 물리적으로 분리되어 있으...2025.01.20
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생화학 실험 보고서 - 단백질 분리2025.01.271. 단백질 분리 이번 실험에서는 MCF-7 세포를 이용하여 동물 세포에서의 단백질 분리 과정을 이해하고 단백질 분석 및 연구를 위한 준비를 하였습니다. 단백질 분리를 위해서는 세포를 깨뜨리고 안정적인 버퍼 환경을 만드는 것이 중요합니다. 다양한 방법으로 세포를 파괴할 수 있으며, 이번 실험에서는 scraper를 사용하여 MCF-7 세포를 깨뜨리고 RIPA 버퍼와 protease 억제제를 첨가하여 단백질을 추출하였습니다. 최종적으로 원심분리를 통해 상층액에 분리된 단백질을 -80°C에 보관하였습니다. 1. 단백질 분리 단백질 분리는...2025.01.27
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