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생화학 실험/실습 보고서 (아미노산의 적정)2025.01.231. 아미노산 적정 이 실험의 목적은 미지의 아미노산 용액을 염기성 용액으로 적정하여 적정 곡선을 통해 어떤 아미노산인지 확인하는 것입니다. 실험 방법은 0.2M NaOH 용액을 제조하고 pH 미터를 보정한 후, 0.1M 미지 아미노산 용액 A 10mL에 NaOH 용액을 0.5mL씩 떨어뜨리면서 pH를 측정하여 적정 그래프를 그리고 대략적인 pKa값과 당량점, 사용한 아미노산이 Lysine, Phenylalanine, Aspartic acid 중 하나인지 확인하는 것입니다. 1. 아미노산 적정 아미노산 적정은 아미노산의 농도를 정확...2025.01.23
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단백질의 분리2025.01.231. 단백질 분리 실험을 통해 원심분리를 이용하여 세포 내 단백질을 분리하는 방법을 익혔다. 단백질 분리를 위해 세포를 깨고 RIPA 버퍼에 녹인 후 원심분리하여 상층액을 얻었다. 이 상층액에는 세포에서 추출된 단백질이 포함되어 있다. 2. SDS-PAGE SDS-PAGE는 단백질의 크기에 따라 분리하는 기법으로, 단백질이 SDS에 의해 변성되어 전하/분자량 비율이 동일해지면 전기장 내에서 크기에 따라 이동속도가 달라져 분리된다. 이를 통해 단백질의 분자량을 확인할 수 있다. 3. 세포 용해 세포를 깨는 방법에는 homogeniza...2025.01.23
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Lowry-Folin법을 이용한 단백질 정량2025.01.231. 단백질 정량 이 실험의 목적은 Lowry-Folin법을 이용하여 수용액에 녹아있는 단백질을 정량하고 흡광도 그래프를 그리는 방법을 익히는 것입니다. 실험 방법에는 BSA 표준곡선 작성, 미지의 단백질 시료 측정, 흡광도 측정 및 분석 등의 단계가 포함되어 있습니다. 2. Lowry-Folin법 Lowry-Folin법은 단백질 정량에 널리 사용되는 방법으로, 구리 이온과 단백질의 반응을 통해 청색 발색 반응이 일어나는 원리를 이용합니다. 이 실험에서는 BSA 표준용액을 이용하여 표준곡선을 작성하고, 미지의 단백질 시료의 농도를 ...2025.01.23
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이화여대 생명과학실험 A+ 리포트(DNA plasmid transfection, Immunoprecipitation)2025.01.231. DNA plasmid transfection DNA plasmid transfection 실험의 목적은 고분자-유전자 복합체를 이용하여 동물 세포에 plasmid DNA를 넣어 세포의 형질을 전환하는 것이다. 이를 위해 먼저 단백질 A에 대한 염기서열 옆에 epitope tag인 V5 폴리펩타이드에 대한 염기서열을 같이 붙여서 플라스미드 DNA를 세포 내에 넣어준다. 그러면 플라스미드가 핵내에 들어가서 DNA 역할을 할 수 있고, 이후 벡터 DNA가 mRNA로 전사되어 V5가 붙은 단백질 A가 발현된다. 2. Immunopre...2025.01.23
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산성탈인산가수분해효소의 분리 및 정제 결과보고서2025.01.231. 산성 탈인산가수분해효소 이 실험의 목적은 세포 또는 조직(맥아)으로부터 산성 탈인산가수분해효소를 추출하고 정제하여 효소 활성도를 측정하는 것입니다. 산성 탈인산가수분해효소는 주로 리소좀에서 작용하며 다양한 생리적 과정에서 중요한 역할을 합니다. 이 효소는 특정 기질(PNPP)로부터 인산기를 떼어내는 가수분해 반응을 촉매합니다. 실험에서는 원심분리와 여과를 통해 효소를 포함한 상층액을 분리하고, MgCl2와 (NH4)2SO4를 이용한 염석 효과로 효소를 정제하였습니다. 2. 원심분리기 사용 원심분리기 사용 시 주의할 점은 로터의...2025.01.23
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A+ 생화학실험 <13주차. His6-tagged Protein Purification> 레포트2025.01.201. 단백질 정제 단백질 정제(Protein Purification)는 생물학적 연구 및 산업적 응용을 위하여 단백질을 혼합물로부터 분리하고 정제하는 과정이다. 이 과정은 일반적으로 여러 단계를 거치며, 각 단계에서는 단백질의 용해도, 크기, 전하, 결합 친화도 등의 단백질 간 서로 다른 특성을 활용하여 단백질을 분리한다. 첫 번째 단계는 세포 용해(Cell Lysis)로, 세포벽을 파괴하여 세포 내의 단백질을 방출하는 것이다. 다음 단계는 affinity chromatography이다. 이 방법은 특정 단백질에 결합하는 리간드를 ...2025.01.20
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A+ 생화학실험 <5주차. Transformation> 레포트2025.01.201. Competent cell (DH5α) DH5α는 recA1 유전자의 160번 아미노산이 glycine에서 aspartic acid로 변이되는 돌연변이로 인하여 endonuclease의 기능을 상실하고 재조합 효소의 활성을 억제되었다. 이에 삽입된 plasmid DNA가 세포 내에서 안정적으로 유지되고 분해되지 않도록 하여, 높은 transformation efficiency(1×10^8 cfu/μg)를 가진다. 2. Plasmid DNA Plasmid DNA는 박테리아의 chromosomal DNA와 물리적으로 분리되어 있으...2025.01.20
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A+ 생화학실험 <6주차. Plasmid DNA Miniprep> 레포트2025.01.201. Plasmid DNA Plasmid DNA는 박테리아 내에 존재하는 extrachromosomal DNA로, 자체적 복제가 가능한 복제 기점을 가지고 있습니다. 생존에 필수적이지 않은 정보를 담고 있으며, 항생제 내성 유전자 같은 선택적 마커가 포함되기도 합니다. 이를 통해 항생제가 포함된 배지에서 cell-selection을 진행할 수 있으며, 이로부터 유전자 발현 여부를 조사할 수 있습니다. 또한 plasmid DNA는 super coiled 형태의 DNA로, 유전자 조작, 분리, cloning 등 유전공학 분야에 용이하게...2025.01.20
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A+ 생화학실험 <4주차. 세포배양법> 레포트2025.01.201. 세포 배양법 세포 배양이란 생물학과 의과학에서 많이 활용되는 기술로, 생물체에서 분리한 세포를 체내 환경이 아닌 액체 및 고체 배지를 비롯한 외부 환경에서 키우는 것을 말한다. 세포 배양은 특정 세포를 증식하거나 관찰하므로 세포에 따른 온도, pH를 비롯하여 적절한 생장 환경을 설정하는 것이 중요하다. 일반적으로, 배지에는 세포가 생명활동을 유지하기 위해 필요한 아세트산, 포도당 등의 영양분이 첨가된다. 필요에 따라, 목적한 세포를 제외한 나머지 세포들을 제거하기 위하여 항생물질을 넣기도 한다. 세포 배양 시, 변수를 제거하기...2025.01.20
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A+ 생화학실험 <3주차. Agarose Gel Electrophoresis> 레포트2025.01.201. 겔 전기영동 겔 전기영동은 분자의 크기나 전하에 따라 DNA, RNA, 단백질을 비롯한 생물학적 분자들을 분리하는 실험방법 중 하나입니다. 전기영동의 원리는 gel matrix (주로 agarose 혹은 polyacrylamide) 내에 시료를 넣고, 양극과 음극으로 전기장을 가하면 분자들이 전하의 성질에 따라 이동하게 되는 것입니다. 분자의 크기 및 전하밀도에 따라 이동 속도에 차이가 발생하기 때문에, 서로 다른 크기 혹은 전하를 가진 분자들을 분리할 수 있습니다. 겔 전기영동에서 분자의 이동속도에 영향을 미치는 요인에는 입...2025.01.20
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