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TA cloning, Mini prep, Enzyme cut 실험2025.11.171. TA Cloning TA cloning은 PCR 산물의 3'-A overhang과 T vector의 3'-T overhang 사이의 상보적 결합을 이용하는 클로닝 방식입니다. T4 DNA ligase를 사용하여 phosphodiester bond를 형성하고 ligation을 진행합니다. 본 실험에서는 insert DNA와 vector의 molar ratio를 1:3으로 설정하여 충분한 ligation이 일어나도록 했습니다. LacZ selection을 통해 transformation 성공 여부를 확인하며, white colon...2025.11.17
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단백질 정량분석 실험 예비레포트2025.11.171. 단백질 정량 분석법 단백질 정량 분석은 시료에 포함된 단백질의 양적 관계를 확인하기 위한 분석으로 많은 생화학 실험의 기본이 된다. 주요 분석법으로는 UV법, Lowry법, BCA법, Bradford법 등이 있다. UV법은 단백질을 구성하는 아미노산 중 방향족 고리를 지닌 티로신과 트립토판이 파장 280nm의 자외선을 잘 흡수한다는 점을 이용하며, Lambert-Beer's Law에 의해 흡광도와 단백질 농도는 비례 관계를 가진다. 2. 단백질의 구조와 기능 단백질은 약 20가지의 다른 아미노산들이 펩타이드 결합에 의해 길게 ...2025.11.17
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세포배양, DNA, RNA 추출 실험2025.11.141. 세포배양 (Cell Culture) 세포배양은 자연환경 외부의 통제된 조건에서 세포가 성장하는 과정이다. HEK 293T cell은 부착성 세포로 plate 바닥에 붙어 자라며, 계대배양을 통해 세포를 유지한다. Trypsin-EDTA를 사용하여 세포를 분리하고, 배지를 교체하며 세포를 배양한다. 세포는 초기 3일간 지연기를 거친 후 증식을 시작하여 plate를 채우고, 영양분 부족으로 정상기에 도달한 후 사멸기에 진입한다. 2. Genomic DNA 추출 (gDNA Isolation) Genomic DNA 추출은 세포용해, ...2025.11.14
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탄수화물의 검출 실험보고서2025.11.141. 탄수화물의 분류 및 구조 탄수화물은 기본단위인 단당(Cn(H₂O)n)으로 이루어져 있으며, 단당, 올리고당, 다당으로 분류된다. 포도당, 과당, 설탕, 전분, 글리코겐, 셀룰로오스 등이 있다. 단당은 더 이상 작은 분자로 분해되지 않으며, 올리고당은 복수의 단당이 축합한 것이고, 다당은 다수의 단당이 축합한 것이다. 탄수화물은 에너지원, 당단백질·당지질의 구성성분, 핵산의 원료 등의 역할을 한다. 2. 환원당과 비환원당 환원당은 분자 내에 알데하이드기를 가지고 있어 환원제로 작용할 수 있으며, 포도당, 과당, 엿당 등이 해당한...2025.11.14
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단백질 검출 실험보고서2025.11.141. 뷰렛반응(Biuret Reaction) 뷰렛 시약은 단백질과 폴리펩티드를 검출하기 위해 사용되는 시약으로, 원래 푸른색을 나타내나 단백질과 반응하면 자주색을 나타낸다. 알칼리성 CuSO₄와 반응하여 보라색의 착화합물을 만들며, 두 개 이상의 펩티드 결합을 가진 화합물도 유사한 착화합물을 만든다. 이 방법으로는 약 1~10mg의 단백질을 정량할 수 있으며, 미량 뷰렛법은 약 0.25~2.0mg까지 정량 가능하다. 착화합물의 색은 1~2시간 동안 안정하지만 그 이상의 시간에서는 색도가 증가한다. 2. 닌하이드린 반응(Ninhydr...2025.11.14
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간조직 지질농도 측정 실험2025.11.161. 콜레스테롤 측정 500nm 파장에서 콜레스테롤의 흡광도를 측정하여 표준곡선을 작성했다. 1조와 2조의 표준곡선 공식은 각각 y = 1283.7x - 60.731 (R² = 0.9928)과 y = 954.46x - 36.968 (R² = 0.9919)이다. 원액과 10배 희석 용액의 콜레스테롤 농도를 표준곡선과 계산식으로 측정했으며, 원액의 경우 두 방법의 차이가 크지 않았으나 10배 희석 용액에서는 큰 차이가 나타났다. 이는 실험 과정에서의 오차로 인한 것으로 분석된다. 2. 중성지질 측정 중성지질 표준곡선은 1조 y = 14...2025.11.16
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효소반응공학 실험: 트립신 반응속도론 분석2025.11.181. 효소반응속도론 및 Michaelis-Menten 방정식 효소반응속도론은 효소의 촉매 반응 속도가 실험의 매개변수에 따라 어떻게 변화하는지 연구하는 분야입니다. Michaelis-Menten 방정식은 기질의 농도와 효소가 촉매 반응의 속도 연관성을 설명하며, 기질농도가 낮을 때는 반응속도가 기질 농도에 비례하지만 일정 농도 이상에서는 증가하지 않습니다. Vmax는 최대반응속도, Km은 최대 반응속도의 절반에 도달하기 위한 기질의 농도로 특정 기질과의 친화도를 나타냅니다. Lineweaver-Burk 방정식은 Michaelis 방...2025.11.18
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단백질 전기영동 실험2025.11.141. SDS-PAGE (Sodium Dodecyl Sulfate - Polyacrylamide Gel Electrophoresis) SDS-PAGE는 단백질의 분자량을 결정하고 단위체의 수와 크기를 파악하는 데 사용되는 전기영동 기법입니다. SDS는 단백질에 음전하를 제공하여 단백질의 고유한 3차 구조를 선형 상태로 변환시킵니다. 이를 통해 단백질의 이동속도가 분자량에만 의존하도록 하며, 분자량이 작을수록 빠르게 이동합니다. 마커 단백질과 비교하여 미지의 단백질 분자량을 확인할 수 있습니다. 2. 전기영동법의 원리 전기영동법은 직류...2025.11.14
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[만점 레포트] 연세대학교 생화학실험(1) 7주차 Peptide Mass Finger-Printing2025.05.041. MALDI-TOF 질량분석법 MALDI-TOF 질량분석법은 고분자 물질에 대해 시료의 분해 없이 기화/이온화가 가능한 방법으로, 일반적으로 질량이 크고 열에 불안정한 생체 고분자나 합성 고분자에 이상적으로 적용할 수 있다. 이 실험에서는 MALDI 이온화 장치와 TOF 질량 분석기를 이용하여 단백질을 동정하는 방법을 공부한다. 2. 단백질 동정 MALDI-TOF 질량분석법을 이용하여 단백질을 동정하는 과정을 설명한다. 시료를 MALDI 장치에 주입하고 질량 분석기로 분석한 후, 결과 스펙트럼을 데이터 검색 엔진에 입력하여 단백...2025.05.04
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단백질 분석(SDS-PAGE & Fluorescence)2025.05.141. SDS-PAGE SDS-PAGE는 Sodium dodecyl sulfate - polyacrylamide gel eletrophoresis의 약자로, 5~250 kDa 사이의 단백질을 분리할 때 사용되는 방법입니다. SDS는 단백질에 결합하여 전하의 영향을 배제하고 크기에 의해 이동속도가 결정되도록 합니다. 또한 DTT와 같은 reducing agent는 단백질의 disulfide bond를 변성시켜 linear한 1차 구조로 만듭니다. SDS-PAGE 후 단백질을 확인하기 위해 Coomassie Briliant Blue, s...2025.05.14
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