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Wnt/β-catenin signaling activation full report2025.01.141. Wnt 신호 전달 경로 Wnt 신호 전달 경로는 세포 운명 결정, 세포 이동, Ca2+ 유입, 기관 형성 등 다양한 세포 반응을 조절하는 경로입니다. Axin, PP2A, APC, CK1, GSK3로 구성된 파괴 복합체는 β-catenin 단백질의 분해를 조절하여 Wnt 신호 전달을 조절합니다. β-catenin은 Wnt 신호 전달에서 다양한 역할을 하는 단백질로, 유전자 발현 조절과 세포 간 부착 조절에 중요한 역할을 합니다. 2. Lithium chloride (LiCl) Lithium chloride (LiCl)는 파괴 ...2025.01.14
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Cycloheximide chase assay를 이용한 단백질 half-life 측정2025.01.141. 단백질 분해 경로 세포 내에는 주요한 단백질 분해 경로인 ubiquitin-proteasome pathway와 autophagy-lysosome pathway가 존재한다. 이 두 경로를 통해 세포 내 단백질이 분해되며, 특정 단백질의 half-life는 이 분해 경로에 따라 달라진다. 2. cycloheximide의 작용 기전 cycloheximide는 진핵세포의 단백질 번역 과정을 억제하여 새로운 단백질 합성을 막는다. 따라서 기존에 존재하던 단백질만 남게 되어 시간에 따른 단백질 분해 정도를 관찰할 수 있다. 3. 단백질 ...2025.01.14
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immunoblots2025.01.221. Immunoblotting Immunoblotting(western blotting)은 전기영동 후 단백질, 특히 양이 적은 단백질의 면역검출을 위한 강력하고 중요한 절차이다. Immunoblotting을 통해 nitrocellulose 또는 polyvinylidene fluoride(PVDF)와 같은 단백질 유지 막 지지체에 고정된 단백질 항원을 검출할 수 있다. 관심 단백질의 검출은 membrane에 노출된 관심 단백질을 특이적으로 인식하는 항체의 결합에 의존한다. 2. House keeping gene House keep...2025.01.22
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IP (Immunoprecipitation)2025.01.231. IP (Immunoprecipitation) 실험주제는 IP (Immunoprecipitation)입니다. IP 기법은 항체를 이용하여 목적 단백질을 침강시켜 분리하는 실험 기법입니다. 실험에서는 FLAG 태그가 붙은 A 단백질을 발현시키고 IP 기법을 통해 분리하였습니다. Western blotting 결과에서 110kDa 부근에서 FLAG-A 단백질이 검출되었고, 50kDa와 26kDa 부근에서는 heavy chain과 light chain이 검출되었습니다. 또한 70kDa 부근에서 non-specific하게 반응된 단백질...2025.01.23
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BCA assay 정량2025.01.241. BCA assay BCA assay는 단백질 정량 방법 중 하나로, 구리 이온이 단백질과 반응하여 발색하는 원리를 이용합니다. A 용액과 B 용액을 50:1 비율로 섞어 사용하며, 표준 단백질 농도를 0, 0.125, 0.25, 0.5, 1, 2 ug/ml로 준비하여 흡광도를 측정합니다. 이를 통해 샘플의 단백질 농도를 계산할 수 있습니다. 샘플 버퍼, 단백질 양, 용해 버퍼의 양 등을 고려하여 western blotting 실험에 사용할 수 있습니다. 1. BCA assay The BCA (Bicinchoninic Acid)...2025.01.24
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Western Blotting 레포트2025.01.211. Western Blotting Western Blotting은 단백질을 감지하고 양을 확인하여 분자량을 측정할 수 있는 방법입니다. 단백질을 polyacrylamide gel에서 전기영동으로 분리하고, nitrocellulose membrane에 옮긴 후, 찾고자 하는 단백질의 primary antibody와 secondary antibody를 이용하여 band를 형상화하는 과정입니다. 이 방법에는 Sample preparation, Electrophoresis를 위한 Gel preparation, Transfer, Antib...2025.01.21
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Western Blotting2025.01.211. Western Blotting Western blotting은 sample 내 특정 단백질의 존재 여부나 크기, 양 등을 확인하는 실험법으로, 해당 단백질과 결합하는 antibody를 이용하여 단백질을 찾아내는 방식을 이용한다. 이 실험을 통해 western blotting의 과정과 원리를 이해할 수 있다. 2. SDS-PAGE SDS-PAGE는 SDS(Sodium Dodecyl Sulfate)로 coating 된 단백질을 2PAGE(Polyacrylamide Gel Electrophoresis)를 통해 크기에 따라 분리하는 ...2025.01.21