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이화여대 생명과학실험 A+ 리포트(Realtime PCR을 이용한 유전자 발현 분석)2025.01.231. RNA sequencing RNA sequencing은 DNA로부터 전사되는 모든 RNA 전사체의 염기서열을 차세대 분석기술을 사용하여 분석하는 기술이다. RNA sequencing을 위해서는 cDNA가 필요한데 cDNA를 준비하는 일반적 과정은 보통 RNA 추출>RNA 선택>cDNA 합성>라이브러리 제작으로 이루어진다. RNA 염기서열 분석 기술을 통해 alternative RNA splicing, 유전자의 발현량, 염기서열의 변이, gene fusion, single nucleotide polymorphism, SNP 등의...2025.01.23
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유전자 클러스터와 반복배열2025.05.101. 유전자 클러스터 유사하거나 동일한 유전자가 이웃하여 배열되어 있는 것을 의미합니다. rRNA 유전자가 대표적인 예로, 45S 전구체 rRNA 유전자가 여러 개 존재하는 유전자 클러스터를 이룹니다. 이러한 유전자 클러스터는 unequal crossing over에 의해 유전자 수가 변화될 수 있으며, 이는 질병 발생의 원인이 될 수 있습니다. 2. 반복배열 매우 짧은 염기서열이 커다란 클러스터 안에 여러 번 반복되는 것을 의미합니다. 이러한 반복배열은 satellite DNA라고 불리며, 주로 heterochromatin 영역에...2025.05.10
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유전발생생물학실험_RT-reaction, qRT-PCR2025.01.131. Reverse transcription Reverse transcription은 RNA를 주형으로 해서 cDNA로서 RNA의 염기순서를 전사하는 반응이다. 이는 레트로바이러스를 생육하기 위해서는 DNA합성이 무조건 필요하다는 연구를 시작으로, 역전사효소를 발견하며 증명되었다. Reverse transcription은 central dogma에서 RNA에서 DNA로 가는것도 있다는 것을 발견한 것이 중요하다. 2. Polymerase Chain Reaction (PCR) Polymerase Chain Reaction은 PCR로 ...2025.01.13
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immunoblots2025.01.221. Immunoblotting Immunoblotting(western blotting)은 전기영동 후 단백질, 특히 양이 적은 단백질의 면역검출을 위한 강력하고 중요한 절차이다. Immunoblotting을 통해 nitrocellulose 또는 polyvinylidene fluoride(PVDF)와 같은 단백질 유지 막 지지체에 고정된 단백질 항원을 검출할 수 있다. 관심 단백질의 검출은 membrane에 노출된 관심 단백질을 특이적으로 인식하는 항체의 결합에 의존한다. 2. House keeping gene House keep...2025.01.22
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구강상피로부터 유전자의 추출 (HKG 이용 PCR & 전기영동) 실험 보고서2025.05.141. PCR (Polymerase Chain Reaction) PCR은 DNA를 증폭하는 기술로, 3단계(Denaturation, Annealing, Extension)로 구성되어 있다. Denaturation 단계에서는 dsDNA가 ssDNA로 분리되고, Annealing 단계에서는 Primer가 ssDNA에 결합한다. Extension 단계에서는 Taq Polymerase가 Primer를 시작점으로 DNA를 합성한다. 이 과정이 반복되면서 DNA가 지수적으로 증폭된다. 2. 전기영동 (Electrophoresis) 전기영동은 D...2025.05.14
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Real-time PCR을 이용한 유전자 발현 분석2025.01.231. 전사(Transcription) 수준에서의 유전자 발현 분석 기법들 유전자 발현 분석 기법에는 Single gene analysis와 Whole genome analysis가 있다. Single gene analysis는 개별 유전자의 발현량을 확인하는 실험 기법으로 Northern Blotting과 Real-time PCR이 있다. Whole genome analysis는 세포 내 전체 유전자의 발현량을 확인하는 실험 기법으로 RNA sequencing이 있다. 2. cDNA 합성에 사용될 수 있는 primer의 종류 cDN...2025.01.23
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RT(역전사효소) PCR 실험 보고서2025.05.141. Reverse Transcriptase (RT) Reverse Transcription 과정을 통해 RNA 주형가닥으로부터 상보적인 DNA(cDNA)를 생성하는 효소. 1970년 RDDP의 발견 이후 눈부신 발전으로 역전사바이러스학과 암 유전학의 토대가 되어왔다. 3가지 효소활성 domain을 가지며, RNA 의존성 DNA polymerase(RDDP), C말단의 RNaseH, DNA 의존성 DNA Polymerase(DDDP)이다. 교정기능(Proofreading)이 없어 돌연변이의 누적이 쉽다. 2. One/Two step...2025.05.14