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동물세포의 배양(생화학실험)2025.01.161. 세포 배양 세포 배양이란 일반적으로 자연환경 외부의 통제된 조건에서 세포가 성장하는 과정을 말한다. 세포는 살아있는 조직에서 분리된 후에는 신중하게 제어된 조건에서 후속적으로 유지되어야 한다. 이러한 조건은 각 세포 유형에 따라 다르지만 일반적으로 필수 영양소, 성장인자, 호르몬, 가스를 공급하는 기질 또는 배지가 있는 적합한 용기로 구성된다. 세포 배양에는 1차 배양, 2차 배양, 계대 배양 등의 방법이 사용된다. 2. 동물세포의 특성 대부분의 동물세포들은 영양분이 아무리 잘 공급된다 하더라도 증식하지 않으며, 필요에 따라서...2025.01.16
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A+ 생화학실험 <4주차. 세포배양법> 레포트2025.01.201. 세포 배양법 세포 배양이란 생물학과 의과학에서 많이 활용되는 기술로, 생물체에서 분리한 세포를 체내 환경이 아닌 액체 및 고체 배지를 비롯한 외부 환경에서 키우는 것을 말한다. 세포 배양은 특정 세포를 증식하거나 관찰하므로 세포에 따른 온도, pH를 비롯하여 적절한 생장 환경을 설정하는 것이 중요하다. 일반적으로, 배지에는 세포가 생명활동을 유지하기 위해 필요한 아세트산, 포도당 등의 영양분이 첨가된다. 필요에 따라, 목적한 세포를 제외한 나머지 세포들을 제거하기 위하여 항생물질을 넣기도 한다. 세포 배양 시, 변수를 제거하기...2025.01.20
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대장균에서 재조합 단백질의 생산과 Western blot에 관한 실험2025.01.131. IPTG IPTG는 대장균 lactose operon의 효소합성을 유도하는 강력한 유도물질이다. 보통 유도물질은 operon의 활동에 의해 만들어지는 β-D-galactosidase에 의해 대사 이용하는 것이 많지만, IPTG는 분해되지 않아 비대사성 유도물질이라고도 불린다. 또한, 고농도로 사용시 galactoside permease가 없는 세포에도 투과할 수 있기 때문에 permease가 없는 균주에서의 유도실험에도 사용된다. 2. Buffer condition Tank buffer에는 glycine과 Cl-(Tris-ba...2025.01.13
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산성탈인산가수분해효소의 분리 및 정제 결과보고서2025.01.231. 산성 탈인산가수분해효소 이 실험의 목적은 세포 또는 조직(맥아)으로부터 산성 탈인산가수분해효소를 추출하고 정제하여 효소 활성도를 측정하는 것입니다. 산성 탈인산가수분해효소는 주로 리소좀에서 작용하며 다양한 생리적 과정에서 중요한 역할을 합니다. 이 효소는 특정 기질(PNPP)로부터 인산기를 떼어내는 가수분해 반응을 촉매합니다. 실험에서는 원심분리와 여과를 통해 효소를 포함한 상층액을 분리하고, MgCl2와 (NH4)2SO4를 이용한 염석 효과로 효소를 정제하였습니다. 2. 원심분리기 사용 원심분리기 사용 시 주의할 점은 로터의...2025.01.23
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[만점 레포트] 연세대학교 생화학실험(1) 7주차 Peptide Mass Finger-Printing2025.05.041. MALDI-TOF 질량분석법 MALDI-TOF 질량분석법은 고분자 물질에 대해 시료의 분해 없이 기화/이온화가 가능한 방법으로, 일반적으로 질량이 크고 열에 불안정한 생체 고분자나 합성 고분자에 이상적으로 적용할 수 있다. 이 실험에서는 MALDI 이온화 장치와 TOF 질량 분석기를 이용하여 단백질을 동정하는 방법을 공부한다. 2. 단백질 동정 MALDI-TOF 질량분석법을 이용하여 단백질을 동정하는 과정을 설명한다. 시료를 MALDI 장치에 주입하고 질량 분석기로 분석한 후, 결과 스펙트럼을 데이터 검색 엔진에 입력하여 단백...2025.05.04
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단백질 분석(SDS-PAGE & Fluorescence)2025.05.141. SDS-PAGE SDS-PAGE는 Sodium dodecyl sulfate - polyacrylamide gel eletrophoresis의 약자로, 5~250 kDa 사이의 단백질을 분리할 때 사용되는 방법입니다. SDS는 단백질에 결합하여 전하의 영향을 배제하고 크기에 의해 이동속도가 결정되도록 합니다. 또한 DTT와 같은 reducing agent는 단백질의 disulfide bond를 변성시켜 linear한 1차 구조로 만듭니다. SDS-PAGE 후 단백질을 확인하기 위해 Coomassie Briliant Blue, s...2025.05.14
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A+ 생화학실험 <5주차. Transformation> 레포트2025.01.201. Competent cell (DH5α) DH5α는 recA1 유전자의 160번 아미노산이 glycine에서 aspartic acid로 변이되는 돌연변이로 인하여 endonuclease의 기능을 상실하고 재조합 효소의 활성을 억제되었다. 이에 삽입된 plasmid DNA가 세포 내에서 안정적으로 유지되고 분해되지 않도록 하여, 높은 transformation efficiency(1×10^8 cfu/μg)를 가진다. 2. Plasmid DNA Plasmid DNA는 박테리아의 chromosomal DNA와 물리적으로 분리되어 있으...2025.01.20
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[만점 레포트] 연세대학교 생화학실험(1) 2주차 pH와 완충용액2025.05.021. pH 측정 pH 측정을 위해 pH 미터를 사용하는 방법에 대해 설명하고 있습니다. pH 미터의 보정, 완충 용액 사용 등 pH 측정을 위한 기본적인 절차와 방법을 다루고 있습니다. 2. 완충 용액 인산염 완충 용액과 암모늄 완충 용액의 제조 방법과 특성에 대해 설명하고 있습니다. 완충 용액의 pH 조절 및 활용 방법 등을 다루고 있습니다. 3. 산-염기 평형 Henderson-Hasselbalch 방정식을 이용하여 pH와 pKa의 관계를 설명하고 있습니다. 이를 통해 산-염기 평형 상태에서의 pH 조절 방법을 다루고 있습니다....2025.05.02
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이화여대 생명과학실험 A+ 리포트(DNA plasmid transfection, Immunoprecipitation)2025.01.231. DNA plasmid transfection DNA plasmid transfection 실험의 목적은 고분자-유전자 복합체를 이용하여 동물 세포에 plasmid DNA를 넣어 세포의 형질을 전환하는 것이다. 이를 위해 먼저 단백질 A에 대한 염기서열 옆에 epitope tag인 V5 폴리펩타이드에 대한 염기서열을 같이 붙여서 플라스미드 DNA를 세포 내에 넣어준다. 그러면 플라스미드가 핵내에 들어가서 DNA 역할을 할 수 있고, 이후 벡터 DNA가 mRNA로 전사되어 V5가 붙은 단백질 A가 발현된다. 2. Immunopre...2025.01.23
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제한효소를 이용한 플라스미드 절단 실험2025.11.171. 제한효소(Restriction Enzyme) 제한효소는 특정 DNA 서열을 인식하여 절단하는 효소이다. 본 실험에서는 Hind III과 Xbal 두 가지 제한효소를 사용하여 플라스미드를 절단했다. 37℃에서 1시간 반응시켜 플라스미드를 특정 위치에서 절단하는 원리를 이해하고, 절단 반응에서 버퍼, 효소 농도, 반응 시간 등의 조건을 고려하는 것이 중요함을 학습했다. 2. 전기영동(Gel Electrophoresis) DNA 분자를 크기에 따라 분리하는 기법으로, 0.8X agarose gel을 사용하여 절단된 플라스미드를 분석...2025.11.17
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