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A+ 생화학실험 <5주차. Transformation> 레포트2025.01.201. Competent cell (DH5α) DH5α는 recA1 유전자의 160번 아미노산이 glycine에서 aspartic acid로 변이되는 돌연변이로 인하여 endonuclease의 기능을 상실하고 재조합 효소의 활성을 억제되었다. 이에 삽입된 plasmid DNA가 세포 내에서 안정적으로 유지되고 분해되지 않도록 하여, 높은 transformation efficiency(1×10^8 cfu/μg)를 가진다. 2. Plasmid DNA Plasmid DNA는 박테리아의 chromosomal DNA와 물리적으로 분리되어 있으...2025.01.20
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[만점 레포트] 연세대학교 생화학실험(1) 2주차 pH와 완충용액2025.05.021. pH 측정 pH 측정을 위해 pH 미터를 사용하는 방법에 대해 설명하고 있습니다. pH 미터의 보정, 완충 용액 사용 등 pH 측정을 위한 기본적인 절차와 방법을 다루고 있습니다. 2. 완충 용액 인산염 완충 용액과 암모늄 완충 용액의 제조 방법과 특성에 대해 설명하고 있습니다. 완충 용액의 pH 조절 및 활용 방법 등을 다루고 있습니다. 3. 산-염기 평형 Henderson-Hasselbalch 방정식을 이용하여 pH와 pKa의 관계를 설명하고 있습니다. 이를 통해 산-염기 평형 상태에서의 pH 조절 방법을 다루고 있습니다....2025.05.02
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생화학 실험/실습 보고서 (아미노산의 적정)2025.01.231. 아미노산 적정 이 실험의 목적은 미지의 아미노산 용액을 염기성 용액으로 적정하여 적정 곡선을 통해 어떤 아미노산인지 확인하는 것입니다. 실험 방법은 0.2M NaOH 용액을 제조하고 pH 미터를 보정한 후, 0.1M 미지 아미노산 용액 A 10mL에 NaOH 용액을 0.5mL씩 떨어뜨리면서 pH를 측정하여 적정 그래프를 그리고 대략적인 pKa값과 당량점, 사용한 아미노산이 Lysine, Phenylalanine, Aspartic acid 중 하나인지 확인하는 것입니다. 1. 아미노산 적정 아미노산 적정은 아미노산의 농도를 정확...2025.01.23
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이화여대 생명과학실험 A+ 리포트(DNA plasmid transfection, Immunoprecipitation)2025.01.231. DNA plasmid transfection DNA plasmid transfection 실험의 목적은 고분자-유전자 복합체를 이용하여 동물 세포에 plasmid DNA를 넣어 세포의 형질을 전환하는 것이다. 이를 위해 먼저 단백질 A에 대한 염기서열 옆에 epitope tag인 V5 폴리펩타이드에 대한 염기서열을 같이 붙여서 플라스미드 DNA를 세포 내에 넣어준다. 그러면 플라스미드가 핵내에 들어가서 DNA 역할을 할 수 있고, 이후 벡터 DNA가 mRNA로 전사되어 V5가 붙은 단백질 A가 발현된다. 2. Immunopre...2025.01.23
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제한효소를 이용한 플라스미드 절단 실험2025.11.171. 제한효소(Restriction Enzyme) 제한효소는 특정 DNA 서열을 인식하여 절단하는 효소이다. 본 실험에서는 Hind III과 Xbal 두 가지 제한효소를 사용하여 플라스미드를 절단했다. 37℃에서 1시간 반응시켜 플라스미드를 특정 위치에서 절단하는 원리를 이해하고, 절단 반응에서 버퍼, 효소 농도, 반응 시간 등의 조건을 고려하는 것이 중요함을 학습했다. 2. 전기영동(Gel Electrophoresis) DNA 분자를 크기에 따라 분리하는 기법으로, 0.8X agarose gel을 사용하여 절단된 플라스미드를 분석...2025.11.17
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Taq DNA polymerase의 발현 및 정제, 확인2025.11.171. Taq DNA polymerase 발현 및 정제 Thermus aquaticus에서 분리한 Taq DNA polymerase는 높은 온도에서도 변성되지 않는 특성이 있어 PCR에 널리 사용된다. E.coli를 숙주세포로 사용하여 pTTQ18 vector에 삽입된 Taq DNA polymerase 유전자를 발현시킨다. IPTG를 첨가하여 lac operon을 활성화시켜 단백질을 과발현시킨다. 세포 파괴는 lysozyme을 이용한 효소적 방법과 계면활성제를 이용한 방법을 사용하며, 고온 처리로 다른 단백질을 변성시킨다. Ammon...2025.11.17
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TA cloning, Mini prep, Enzyme cut 실험2025.11.171. TA Cloning TA cloning은 PCR 산물의 3'-A overhang과 T vector의 3'-T overhang 사이의 상보적 결합을 이용하는 클로닝 방식입니다. T4 DNA ligase를 사용하여 phosphodiester bond를 형성하고 ligation을 진행합니다. 본 실험에서는 insert DNA와 vector의 molar ratio를 1:3으로 설정하여 충분한 ligation이 일어나도록 했습니다. LacZ selection을 통해 transformation 성공 여부를 확인하며, white colon...2025.11.17
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단백질 정량분석 실험 예비레포트2025.11.171. 단백질 정량 분석법 단백질 정량 분석은 시료에 포함된 단백질의 양적 관계를 확인하기 위한 분석으로 많은 생화학 실험의 기본이 된다. 주요 분석법으로는 UV법, Lowry법, BCA법, Bradford법 등이 있다. UV법은 단백질을 구성하는 아미노산 중 방향족 고리를 지닌 티로신과 트립토판이 파장 280nm의 자외선을 잘 흡수한다는 점을 이용하며, Lambert-Beer's Law에 의해 흡광도와 단백질 농도는 비례 관계를 가진다. 2. 단백질의 구조와 기능 단백질은 약 20가지의 다른 아미노산들이 펩타이드 결합에 의해 길게 ...2025.11.17
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세포배양, DNA, RNA 추출 실험2025.11.141. 세포배양 (Cell Culture) 세포배양은 자연환경 외부의 통제된 조건에서 세포가 성장하는 과정이다. HEK 293T cell은 부착성 세포로 plate 바닥에 붙어 자라며, 계대배양을 통해 세포를 유지한다. Trypsin-EDTA를 사용하여 세포를 분리하고, 배지를 교체하며 세포를 배양한다. 세포는 초기 3일간 지연기를 거친 후 증식을 시작하여 plate를 채우고, 영양분 부족으로 정상기에 도달한 후 사멸기에 진입한다. 2. Genomic DNA 추출 (gDNA Isolation) Genomic DNA 추출은 세포용해, ...2025.11.14
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탄수화물의 검출 실험보고서2025.11.141. 탄수화물의 분류 및 구조 탄수화물은 기본단위인 단당(Cn(H₂O)n)으로 이루어져 있으며, 단당, 올리고당, 다당으로 분류된다. 포도당, 과당, 설탕, 전분, 글리코겐, 셀룰로오스 등이 있다. 단당은 더 이상 작은 분자로 분해되지 않으며, 올리고당은 복수의 단당이 축합한 것이고, 다당은 다수의 단당이 축합한 것이다. 탄수화물은 에너지원, 당단백질·당지질의 구성성분, 핵산의 원료 등의 역할을 한다. 2. 환원당과 비환원당 환원당은 분자 내에 알데하이드기를 가지고 있어 환원제로 작용할 수 있으며, 포도당, 과당, 엿당 등이 해당한...2025.11.14
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