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대장균에서 재조합 단백질의 생산과 Western blot에 관한 실험2025.01.131. IPTG IPTG는 대장균 lactose operon의 효소합성을 유도하는 강력한 유도물질이다. 보통 유도물질은 operon의 활동에 의해 만들어지는 β-D-galactosidase에 의해 대사 이용하는 것이 많지만, IPTG는 분해되지 않아 비대사성 유도물질이라고도 불린다. 또한, 고농도로 사용시 galactoside permease가 없는 세포에도 투과할 수 있기 때문에 permease가 없는 균주에서의 유도실험에도 사용된다. 2. Buffer condition Tank buffer에는 glycine과 Cl-(Tris-ba...2025.01.13
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Protein electro-transfer and Western blot 실험보고서2025.01.161. Western blot Western blot은 찾고자 하는 protein의 antigen epitope와 반응하는 antibody를 이용하여 단백질 혼합물 중에서 원하는 단백질(antigen)을 찾아내는 방법이다. 전기 영동을 이용하여 단백질을 gel 상에서 크기에 따라 분리한 후, membrane에 transfer한다. Membrane에 발광하는 probe가 붙어 있는 antibody를 붙여주는 항원-항체 반응을 이용하여 찾고자 하는 특정 단백질을 검출한다. 2. Nitrocellulose membrane Nitrocell...2025.01.16
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유전학실험 Gene insertion & deletion2025.01.181. PCR (Polymerase Chain Reaction) PCR은 DNA를 빠르게 증폭시키는 방법으로, Denaturation, Annealing, Elongation의 3단계로 구성된다. Denaturation에서 DNA는 95℃의 고온에 의해 single strand가 되며, Annealing에서 primer가 결합한다. Elongation에서는 약 75℃에서 DNA polymerase의 작용에 의해 DNA의 길이 신장이 일어난다. PCR의 결과값에 영향을 미치는 요인에는 각 단계의 온도, cycle 횟수, buffer s...2025.01.18
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Protein Regulation2025.01.181. Auxin-induced degron system Auxin-induced degron system은 특정 target protein을 원하는 상황에서 제거하기 위해 사용되는 방식으로, AID가 결합된 protein과 OsTir1이 같이 존재할 경우에 IAA(auxin)가 존재하지 않을 경우에는 정상적으로 protein이 존재할 수 있지만, IAA가 존재할 경우 IAA가 AID와 OsTir1을 연결하는 bridge 역할을 하고 polyubiquitin 구조가 형성되며 이는 이후 proteosome에 의해 빠르게 분해되어 pro...2025.01.18
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이화여대 생명과학실험 A+ 리포트(Western Blot)2025.01.231. Western Blot 원리 Western Blot은 항원-항체 반응을 이용하여 여러 단백질의 혼합물로부터 특정 단백질을 찾아내는 방법이다. 이 실험에서는 단백질의 SDS-PAGE 분리, 단백질의 membrane으로의 transfer, 항원-항체 반응 및 항체에 부착된 효소의 반응에 의한 발색 반응 등의 실험 원리 및 기법을 습득한다. 2. SDS-PAGE와 Stacking/Resolving Gel의 차이 Stacking gel은 단백질 시료를 gel에 loading 했을 때 모든 시료가 동일한 시작점에서 출발할 수 있도록 하...2025.01.23
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Cell harvest and protein assay2025.01.231. Cell harvest 세포 배양 시 adherent cell과 suspension cell로 구분할 수 있으며, adherent cell을 harvest하는 방법에는 화학적 방법(trypsin, accutase 사용)과 물리적 방법(scraper 사용)이 있다. 이번 실험에서는 물리적 방법인 scraper를 사용하여 adherent cell을 harvest하였다. 2. Protein extraction 세포 내 단백질을 추출하기 위해 lysis buffer와 phosphatase/protease inhibitor를 사용하여 ...2025.01.23
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Protein Electro-transfer and Western blot2025.01.231. Western blotting Western blotting은 단백질에 대한 blotting 기술을 뜻하며, 항원-항체 반응을 이용한다. 단백질 혼합물을 polyacrylamide gel에서 SDS-PAGE를 이용하여 크기에 따라 분리하고 membrane으로 electro-transfer하여 흡착시킨 후 membrane 표면에서 항체를 이용하여 원하는 단백질의 존재를 확인하는 전반적인 과정을 의미한다. 2. SDS의 역할 및 원리 SDS-PAGE는 SDS가 단백질에 일정 간격으로 결합하여 charge density를 일정하게 ...2025.01.23
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[생화학실험] Western blot Analysis 완충용액 제조와 시약 제조 시 유의사항2025.01.291. Western Blot Analysis Western Blot은 전기영동을 통해 분리된 단백질 중 항원-항체 반응을 이용하여 특정 단백질의 존재를 확인하는 방법입니다. 실험 과정 중 과도한 pH 변화를 안정화시키기 위해 완충용액(Buffer)를 사용하는데, Western Blot Analysis에 필요한 완충용액은 Tris-Buffered Saline, Tris-Glycine, Transfer Buffer 등이 있습니다. 2. Tris-Buffered Saline Tris-Buffered Saline은 용액의 pH를 조절하는 ...2025.01.29
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생명과학실험1 Western Blot2025.01.171. Western Blot Western Blot은 gel 전기영동을 통해 단백질을 분리하고, 특정 단백질의 존재 여부를 확인하는 실험이다. 이 실험에서는 SDS-PAGE를 이용하여 단백질을 크기별로 분류하고, 분류된 단백질을 membrane으로 옮긴 후에 항원-항체 상보적 결합을 이용하여 단백질의 존재 여부를 시각화하여 결과를 확인한다. 2. SDS-PAGE SDS-PAGE는 SDS라는 detergent를 사용하여 단백질의 구조를 선형으로 만듦으로써 단백질의 전하 밀도를 일정하게 만들고, 결국 단백질들이 크기로만 분류될 수 있게...2025.01.17
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생명과학실험1 ELISA2025.01.171. ELISA 실험의 원리 ELISA 실험은 항원-항체 결합 반응과 효소를 이용한 발색 반응을 통해 특정 항원의 존재 여부 및 농도를 분석하는 기법이다. 항체와 항원의 특이적 결합과 효소-기질 반응을 이용하여 목표 항원을 검출할 수 있다. 2. ELISA의 종류 ELISA에는 Direct ELISA, Indirect ELISA, Sandwich ELISA 등 다양한 방식이 있다. 각 방식은 항원과 항체의 배치와 사용되는 항체의 수에 따라 차이가 있다. Indirect ELISA는 2차 항체를 사용하여 다양한 1차 항체에 대한 검출...2025.01.17
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