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생명과학 보고서_SDS-PAGE & Western blot(아주대 전공실험2)2025.05.161. SDS-PAGE SDS-PAGE는 단백질을 분자량에 따라 분리하는 기법으로, 단백질 시료에 SDS를 처리하여 단백질의 3차 구조를 풀어 선형화시킨 후 전기영동을 통해 분리한다. SDS는 단백질에 결합하여 음전하를 띠게 하므로, 단백질은 분자량에 비례하여 양극으로 이동하게 된다. 이를 통해 복잡한 단백질 혼합물을 효과적으로 분리할 수 있다. 2. Western blot Western blot은 특정 단백질의 유무 또는 양을 확인하는 분석 방법이다. 전기영동으로 분리된 단백질을 membrane에 전이시킨 후, 표적 단백질에 특이적...2025.05.16
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생화학실험 단백질의 정성분석2025.05.061. Western blot Western blot은 단백질을 폴리아크릴아마이드 겔에서 전기영동을 이용하여 분리하고, 니트로셀룰로오스 membrane에 옮긴 후 찾고자 하는 단백질의 항체(1차 항체)와 결합시킨 후 이 항체와 반응하는 2차 항체를 이용하여 밴드를 형상화하는 기술이다. 이 기술은 크기별 분리, 단백질을 고체 지지체로 이동, 1차 및 2차 항체를 사용하여 표적 단백질을 표시하여 시각화하는 3가지 요소를 사용한다. 2. SDS-PAGE SDS-PAGE는 질량에 의한 단백질 분리가 가능한 전기 영동법이다. 폴리아크릴아마이드...2025.05.06
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Protein Regulation2025.01.181. Auxin-induced degron system Auxin-induced degron system은 특정 target protein을 원하는 상황에서 제거하기 위해 사용되는 방식으로, AID가 결합된 protein과 OsTir1이 같이 존재할 경우에 IAA(auxin)가 존재하지 않을 경우에는 정상적으로 protein이 존재할 수 있지만, IAA가 존재할 경우 IAA가 AID와 OsTir1을 연결하는 bridge 역할을 하고 polyubiquitin 구조가 형성되며 이는 이후 proteosome에 의해 빠르게 분해되어 pro...2025.01.18
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Cell Transfection and Cell lysis 레포트2025.01.211. Cell Transfection Cell transfection은 관심있는 외부 gene을 세포에 인공적으로 도입하여 외부 DNA가 세포 내에서 발현되도록 하는 과정입니다. 이를 통해 세포의 특성을 변화시켜 유전자나 단백질의 발현과 기능을 연구할 수 있습니다. 다양한 화학적, 물리적, 바이러스 매개 방법이 사용되며, 특히 HEK-293T 세포는 transfection 효율이 높아 널리 사용됩니다. 또한 epitope tagging 기술을 통해 단백질의 특성을 분석할 수 있습니다. 2. Cell Lysis Cell lysis는 ...2025.01.21
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[생화학실험] Western blot Analysis 완충용액 제조와 시약 제조 시 유의사항2025.01.291. Western Blot Analysis Western Blot은 전기영동을 통해 분리된 단백질 중 항원-항체 반응을 이용하여 특정 단백질의 존재를 확인하는 방법입니다. 실험 과정 중 과도한 pH 변화를 안정화시키기 위해 완충용액(Buffer)를 사용하는데, Western Blot Analysis에 필요한 완충용액은 Tris-Buffered Saline, Tris-Glycine, Transfer Buffer 등이 있습니다. 2. Tris-Buffered Saline Tris-Buffered Saline은 용액의 pH를 조절하는 ...2025.01.29
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SDS-PAGE & Western Blot 결과 레포트2025.05.111. SDS-PAGE SDS-PAGE는 단백질을 크기에 따라 분리하는 기술로, 단백질을 SDS로 변성시켜 음전하를 띄게 한 뒤 전기영동을 통해 분리한다. Stacking gel과 Separating gel의 pH 차이를 이용해 단백질을 동일한 선상에 정렬시킨 후 크기에 따라 분리한다. 이를 통해 단백질의 분자량을 추정할 수 있다. 2. Western Blot Western Blot은 SDS-PAGE로 분리된 단백질을 membrane에 전이시킨 뒤, 특정 단백질을 항체를 이용해 검출하는 기술이다. 1차 항체와 2차 항체를 이용해 목적...2025.05.11
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Western Blot (Immunoblotting) 생화학 실험 레포트2025.12.131. Western Blot (Immunoblotting) Western blot은 항원-항체 반응의 특이성을 이용하여 단백질을 검출하는 방법이다. SDS-PAGE를 통해 전기적으로 분리된 단백질을 membrane에 옮긴 후, primary antibody와 secondary antibody를 이용하여 target protein을 검출한다. 이 방법은 높은 특이성과 감도를 가지며, 혼합 단백질 시료의 정량 분석에 유용하게 사용된다. 실험에서는 α-TUB antibody를 사용하여 tubulin 단백질을 검출했다. 2. SDS-PAG...2025.12.13
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Western blot 실험 방법2025.05.101. Western blotting Western blotting (immunoblotting)은 샘플 내 특정 단백질의 존재 여부, 양, 크기를 측정하는 실험이다. 단백질이 소량이어도 검출 가능하고, 다양한 종류의 단백질이 혼합된 시료를 검사할 때도 항체의 기질 특이성 덕분에 원하는 단백질만 검출할 수 있다는 장점이 있다. 2. Western blot 실험 순서 Western blot 실험은 크게 5개의 순서로 이루어진다. 1) SDS-PAGE를 시행하여 단백질을 크기별로 분리, 2) 분리된 단백질을 membrane에 전이, 3)...2025.05.10
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이화여대 생명과학실험 A+ 리포트(Western Blot)2025.01.231. Western Blot 원리 Western Blot은 항원-항체 반응을 이용하여 여러 단백질의 혼합물로부터 특정 단백질을 찾아내는 방법이다. 이 실험에서는 단백질의 SDS-PAGE 분리, 단백질의 membrane으로의 transfer, 항원-항체 반응 및 항체에 부착된 효소의 반응에 의한 발색 반응 등의 실험 원리 및 기법을 습득한다. 2. SDS-PAGE와 Stacking/Resolving Gel의 차이 Stacking gel은 단백질 시료를 gel에 loading 했을 때 모든 시료가 동일한 시작점에서 출발할 수 있도록 하...2025.01.23
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Cell harvest and protein assay2025.01.231. Cell harvest 세포 배양 시 adherent cell과 suspension cell로 구분할 수 있으며, adherent cell을 harvest하는 방법에는 화학적 방법(trypsin, accutase 사용)과 물리적 방법(scraper 사용)이 있다. 이번 실험에서는 물리적 방법인 scraper를 사용하여 adherent cell을 harvest하였다. 2. Protein extraction 세포 내 단백질을 추출하기 위해 lysis buffer와 phosphatase/protease inhibitor를 사용하여 ...2025.01.23
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