총 33개
-
단백질의 분리2025.01.231. 단백질 분리 실험을 통해 원심분리를 이용하여 세포 내 단백질을 분리하는 방법을 익혔다. 단백질 분리를 위해 세포를 깨고 RIPA 버퍼에 녹인 후 원심분리하여 상층액을 얻었다. 이 상층액에는 세포에서 추출된 단백질이 포함되어 있다. 2. SDS-PAGE SDS-PAGE는 단백질의 크기에 따라 분리하는 기법으로, 단백질이 SDS에 의해 변성되어 전하/분자량 비율이 동일해지면 전기장 내에서 크기에 따라 이동속도가 달라져 분리된다. 이를 통해 단백질의 분자량을 확인할 수 있다. 3. 세포 용해 세포를 깨는 방법에는 homogeniza...2025.01.23
-
Cell harvest and protein assay2025.01.231. Cell harvest 세포 배양 시 adherent cell과 suspension cell로 구분할 수 있으며, adherent cell을 harvest하는 방법에는 화학적 방법(trypsin, accutase 사용)과 물리적 방법(scraper 사용)이 있다. 이번 실험에서는 물리적 방법인 scraper를 사용하여 adherent cell을 harvest하였다. 2. Protein extraction 세포 내 단백질을 추출하기 위해 lysis buffer와 phosphatase/protease inhibitor를 사용하여 ...2025.01.23
-
SDS-PAGE를 통한 단백질 분리 실험2025.01.031. SDS-PAGE SDS-PAGE는 단백질을 분자량에 따라 분리하는 기법으로, 단백질을 SDS로 변성시켜 모든 단백질이 유사한 전하/분자량 비를 가지도록 만든 후 전기영동을 통해 분리한다. 이 실험에서는 SDS-PAGE의 원리와 사용되는 시약들의 특성을 이해하고, 실제로 단백질 분리 실험을 진행하여 결과를 분석하였다. 2. 단백질 변성 SDS는 단백질의 3차원 구조를 풀어 선형 구조로 만들어 주며, 단백질에 음전하를 부여한다. 이를 통해 단백질의 고유 전하와 상관없이 분자량에 따라 분리할 수 있게 된다. 실험에서는 단백질 시료를...2025.01.03
-
Protein Regulation2025.01.181. Auxin-induced degron system Auxin-induced degron system은 특정 target protein을 원하는 상황에서 제거하기 위해 사용되는 방식으로, AID가 결합된 protein과 OsTir1이 같이 존재할 경우에 IAA(auxin)가 존재하지 않을 경우에는 정상적으로 protein이 존재할 수 있지만, IAA가 존재할 경우 IAA가 AID와 OsTir1을 연결하는 bridge 역할을 하고 polyubiquitin 구조가 형성되며 이는 이후 proteosome에 의해 빠르게 분해되어 pro...2025.01.18
-
SDS-PAGE 이론2025.05.071. SDS-PAGE SDS-PAGE는 Sodium Dodecyl Sulfate- Polyacrylamide gel electrophoresis의 약자이다. SDS는 음이온성 계면활성제의 일종으로 단백질의 가용화제로서 이용되고 있으며 단백질의 전기영동에서 SDS-PAGE법이 가장 일반적인 방법으로 이용된다. SDS-PAGE의 원리는, 단백질을 구성하는 아미노산에 의해서 +,- 상관없이 어느쪽이건 전하를 띄지만 SDS가 결합함으로써 일시적으로 단백질이(-)하전을 띄어 모든 분자를 양극으로 이동시키고, gel의 pore 사이즈에 의해서...2025.05.07
-
Western blot 실험 방법2025.05.101. Western blotting Western blotting (immunoblotting)은 샘플 내 특정 단백질의 존재 여부, 양, 크기를 측정하는 실험이다. 단백질이 소량이어도 검출 가능하고, 다양한 종류의 단백질이 혼합된 시료를 검사할 때도 항체의 기질 특이성 덕분에 원하는 단백질만 검출할 수 있다는 장점이 있다. 2. Western blot 실험 순서 Western blot 실험은 크게 5개의 순서로 이루어진다. 1) SDS-PAGE를 시행하여 단백질을 크기별로 분리, 2) 분리된 단백질을 membrane에 전이, 3)...2025.05.10
-
SDS-PAGE & Western Blot 결과 레포트2025.05.111. SDS-PAGE SDS-PAGE는 단백질을 크기에 따라 분리하는 기술로, 단백질을 SDS로 변성시켜 음전하를 띄게 한 뒤 전기영동을 통해 분리한다. Stacking gel과 Separating gel의 pH 차이를 이용해 단백질을 동일한 선상에 정렬시킨 후 크기에 따라 분리한다. 이를 통해 단백질의 분자량을 추정할 수 있다. 2. Western Blot Western Blot은 SDS-PAGE로 분리된 단백질을 membrane에 전이시킨 뒤, 특정 단백질을 항체를 이용해 검출하는 기술이다. 1차 항체와 2차 항체를 이용해 목적...2025.05.11
-
SDS PAGE 실험보고서2025.05.041. SDS PAGE SDS PAGE란 Sodium Dodecyl Sulphate -Polyacrylamide Gel Electrophoresis의 줄임말로써, PAGE는 전기영동법을 지칭하는 말로서 사용되기도 하고, 때로는 겔 자체를 지칭하기도 한다. 이를 사용한 전기 영동법 역시 기본적 원리는 한천을 이용한 것과 같다. 허나 폴리아크릴아마이드 겔은 한천 겔에 비해 훨씬 촘촘한 다공성 물질이기 때문에 한천을 이용할 때에 비해 분자량이 작고 크기 차이가 작은 시료들을 분리할 때 이용한다. 따라서 또다른 고분자 물질이지만 핵산에 비해...2025.05.04
-
생화학 실험/실습 보고서 (전기영동을 이용한 단백질의 관찰)2025.01.231. SDS-PAGE SDS-PAGE는 도데실황화 나트륨 폴리아크릴아마이드 겔 전기영동으로, 단백질이 전기장에 가해진 gel에서 크기에 따라 이동속도가 다름을 이용해 이들을 분리 및 분석하는 기법이다. SDS는 단백질의 3차원 구조를 풀어주고 단백질이 같은 전하/분자량을 가지도록 만들어준다. 단백질이 running gel에서 크기에 따라 이동성을 다르게 나타내는 원리를 이용하여 단백질을 분리한다. 2. 등전점 전기영동 등전점 전기영동은 단백질을 pH 기울기가 존재하는 gel에 놓고 전기장을 가해 주면, 단백질이 환경에 따른 전하를 ...2025.01.23
-
이화여대 생명과학실험 A+ 리포트(Western Blot)2025.01.231. Western Blot 원리 Western Blot은 항원-항체 반응을 이용하여 여러 단백질의 혼합물로부터 특정 단백질을 찾아내는 방법이다. 이 실험에서는 단백질의 SDS-PAGE 분리, 단백질의 membrane으로의 transfer, 항원-항체 반응 및 항체에 부착된 효소의 반응에 의한 발색 반응 등의 실험 원리 및 기법을 습득한다. 2. SDS-PAGE와 Stacking/Resolving Gel의 차이 Stacking gel은 단백질 시료를 gel에 loading 했을 때 모든 시료가 동일한 시작점에서 출발할 수 있도록 하...2025.01.23
3 / 4
