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플라스미드 DNA 정제2025.01.121. 플라스미드 DNA 분리 플라스미드 DNA는 재조합 DNA 조작을 위한 운반체 DNA로 사용되며, 대장균에 플라스미드를 삽입하는 과정을 Bacterial Transformation이라고 한다. 대장균 세포에는 플라스미드 DNA와 염색체 DNA가 독립적으로 존재하므로, 플라스미드 DNA를 따로 분리하는 과정을 Purification of plasmid DNA라고 한다. 알칼리 용해법(Alkali lysis)은 높은 pH의 알칼리성 용액을 사용하여 세포벽과 세포막을 용해시킨 후, 산성 용액을 처리하여 플라스미드 DNA만을 분리해내는...2025.01.12
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Cell harvest and protein assay2025.01.231. Cell harvest 세포 배양 시 adherent cell과 suspension cell로 구분할 수 있으며, adherent cell을 harvest하는 방법에는 화학적 방법(trypsin, accutase 사용)과 물리적 방법(scraper 사용)이 있다. 이번 실험에서는 물리적 방법인 scraper를 사용하여 adherent cell을 harvest하였다. 2. Protein extraction 세포 내 단백질을 추출하기 위해 lysis buffer와 phosphatase/protease inhibitor를 사용하여 ...2025.01.23
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SDS-PAGE를 이용한 AP 단백질 분석 및 Coomassie Blue Staining2025.01.171. SDS-PAGE를 이용한 단백질 분석 SDS-PAGE 실험을 통해 AP 단백질의 크기와 순도를 확인할 수 있었습니다. SDS-PAGE 과정에서 단백질의 3차 구조를 제거하고 크기에 따라 분리되도록 하여, 목표 단백질인 AP 단백질을 선별적으로 확인할 수 있었습니다. 또한 Coomassie Blue 염색을 통해 단백질 밴드를 시각화하여 분석할 수 있었습니다. 2. 단백질 정제 과정 단백질 정제 과정에서 target 단백질 이외의 비특이적으로 결합한 단백질들이 씻겨나가면서 target 단백질의 순도가 높아지는 것을 확인할 수 있었...2025.01.17
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아주대학교 A+ 생명과학 실험 효소반응2025.01.131. 효소 반응 이번 효소 반응 실험은 온도와 pH에 변화를 주면서 전분 분해효소 아밀라제가 활성화되는 최적의 조건을 찾는 실험을 진행하였다. 효소는 각각 최적의 온도와 pH가 있는데 실험에 사용한 아밀라제의 경우 이론 상 최적의 pH는 6.7~7이고, 알파 아밀라제는 36.5이고 베타 아밀라제는 55~65 이다. 실험 결과 pH와 온도 모두 이론값과 일치하는 것을 알 수 있었다. 다만 85도의 3pH에서도 흡광도가 비교적 큰 값이 나온 것은 실험 과정에서 오류가 발생했을 것으로 추정된다. 2. 아밀라제 아밀라제는 아밀레이스라고도 ...2025.01.13
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PCR을 이용한 유전자 증폭 실험 예비 보고서2025.01.031. PCR(중합효소 연쇄반응) PCR은 단백질(표적 핵산)을 증폭해서 검출하는 검사법으로, 두 개의 primer(시발체) 사이에 낀 DNA를 시험관 내에서 대량(20만~50만배)으로 증폭시킬 수 있는 혁명적인 방법입니다. PCR은 DNA의 해리(denaturation), primer와 주형 DNA의 결합(Annealing), DNA의 신장(Extension)의 3단계로 이루어지며, 이를 1 cycle로 하여 2의 제곱으로 증폭됩니다. PCR은 생물의 분류, 의료(유전병 진단), 범죄 수사(DNA 지문 분석) 등 DNA를 취급하는 ...2025.01.03
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이화여대 생명과학실험 A+ 리포트(DNA plasmid transfection, Immunoprecipitation)2025.01.231. DNA plasmid transfection DNA plasmid transfection 실험의 목적은 고분자-유전자 복합체를 이용하여 동물 세포에 plasmid DNA를 넣어 세포의 형질을 전환하는 것이다. 이를 위해 먼저 단백질 A에 대한 염기서열 옆에 epitope tag인 V5 폴리펩타이드에 대한 염기서열을 같이 붙여서 플라스미드 DNA를 세포 내에 넣어준다. 그러면 플라스미드가 핵내에 들어가서 DNA 역할을 할 수 있고, 이후 벡터 DNA가 mRNA로 전사되어 V5가 붙은 단백질 A가 발현된다. 2. Immunopre...2025.01.23
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다양한 식물조직의 관찰(줄기) 결과보고서2025.01.271. 쌍자엽식물과 단자엽식물의 줄기 구조 비교 이번 실험에서는 쌍자엽식물인 샐러리와 단자엽식물인 아스파라거스의 줄기 조직을 관찰하였다. 쌍자엽식물 줄기의 특징은 관다발이 규칙적으로 배열되어 있고 형성층에 의해 부피 생장이 일어나 줄기가 굵어질 수 있다. 반면 단자엽식물 줄기는 관다발이 흩어져 있고 형성층이 없어 줄기가 굵어지지 않는다. 실험 결과, 샐러리 줄기에서는 체관과 물관의 구분이 비교적 뚜렷했지만 아스파라거스 줄기에서는 관찰이 어려웠다. 이를 통해 쌍자엽식물과 단자엽식물의 줄기 구조적 차이를 이해할 수 있었다. 2. 식물 줄...2025.01.27
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양파 뿌리의 체세포 분열 관찰2025.05.031. 세포주기 세포주기는 세포가 성장하고 분열하면서 거치게 되는 많은 단계들을 말한다. 분열 중인 모세포에서 세포 한 개가 처음 생긴 시점부터 다시 2개의 세포로 분열되는 시점까지의 순차적인 사건이다. 세포주기는 DNA가 복제되는 성장기(간기), 세포분열이 일어나는 시기(M기)로 이루어져있다. 2. 체세포 분열 체세포 분열은 전기, 중기, 후기, 말기의 단계로 구분된다. 전기에는 핵과 세포질에 큰 변화가 생기고, 중기에는 방추체의 형성이 완전해지며, 후기에는 자매염색분체들이 서로 분리되는 과정이 일어난다. 말기에는 방추체 끝에 염색...2025.05.03
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Ion Exchange Column Chromatography2025.01.211. Alkaline Phosphatase (AP) Alkaline Phosphatase (AP)는 인산기(phosphate group)을 떼어내는 기능을 하며, alkaline condition에서 활성을 띠는 특징을 가진다. AP는 E. coli의 outer membrane과 inner membrane 사이의 periplasmic space에 존재한다. 2. Protein Purification AP를 정제하기 위해 osmotic shock, centrifuge, dialysis, heat inactivation 등의 과정을 거...2025.01.21
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이화여대 생명과학실험 A+ 리포트(Realtime PCR을 이용한 유전자 발현 분석)2025.01.231. RNA sequencing RNA sequencing은 DNA로부터 전사되는 모든 RNA 전사체의 염기서열을 차세대 분석기술을 사용하여 분석하는 기술이다. RNA sequencing을 위해서는 cDNA가 필요한데 cDNA를 준비하는 일반적 과정은 보통 RNA 추출>RNA 선택>cDNA 합성>라이브러리 제작으로 이루어진다. RNA 염기서열 분석 기술을 통해 alternative RNA splicing, 유전자의 발현량, 염기서열의 변이, gene fusion, single nucleotide polymorphism, SNP 등의...2025.01.23
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