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자외 및 가시분광광도계2025.01.111. 자외 및 가시분광광도계 자외 및 가시 분광광도계는 단백질을 정량할 수 있는 중요한 실험 기법이다. 단백질은 세포보다도 훨씬 작아 육안으로 관찰하기 어려우므로 분광광도법을 이용하여 단백질의 양을 정량할 수 있다. 분광광도법은 효소반응 연구와 약물 효과 평가에 활용될 수 있다. 실험에서는 주로 자외선과 가시광선 영역의 빛을 사용하며, 비어의 법칙에 따라 시료의 농도와 흡광도 간의 관계를 파악할 수 있다. BCA assay는 단백질이 구리 이온을 환원시키는 성질을 이용하여 단백질의 양을 정량하는 방법이다. 1. 자외 및 가시분광광도...2025.01.11
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서울대 생물학실험1 A+ general observation2025.01.151. 세포 관찰 이번 실험에서 다양한 세포를 광학현미경으로 관찰하고 특징들을 살펴보았다. 구강세포와 양파세포를 관찰하여 세포벽 유무에 따른 세포의 구조와 배열방식의 차이를 확인하였다. 2. 세포 분열 체세포분열과 생식세포분열을 관찰하여, 각 과정을 통해 세포의 생식과 생장을 이해하였다. 양파의 뿌리세포와 호밀이삭을 통해 식물세포와 동물세포의 분열 특징을 비교하였다. 3. 단백질 정량 BSA 단백질의 농도에 따른 흡광도를 측정한 뒤, 선형회귀 분석을 통해 단백질 농도와 흡광도가 비례함을 확인하였다. 미지의 시료 흡광도를 측정하여 단백...2025.01.15
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재결합 단백질의 발현/ Expression of recombinant proteins in E. coli2025.01.121. GST-tagged Proteins glutathione S-transferase (GST), histidine (HIS), 기타 친화성 태그를 이용하여 단백질을 정제하게 되면 기존에 잘 알려진 생화학적 특성을 가진 단백질과 알려지지 않은 생화학적 특성을 가진 재조합 단백질의 N 말단에 결합하여 정제를 도와준다. GST 단백질은 번역 시에 안정적이고 가용성이 높은 단백질로 빠르게 접히기 때문에, GST 태그를 포함하면 태그가 없을 때보다 더 잘 발현하고 용해도를 촉진하는 경우가 많다. 2. BCA assay BCA는 Lowry...2025.01.12
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서강대학교 일반생물학실험1 실험 6. GFP 단백질과 단백질 정량 (Protein Measurements)2025.01.021. 단백질 정량 방법 실험에서는 Lowry assay와 Extinction coefficient assay 두 가지 단백질 정량 방법을 사용하여 EGFP의 질량농도를 측정하였다. Lowry assay는 Biuret reaction과 Folin reaction을 거쳐 750nm에서 흡광도를 측정하고 BSA 표준곡선을 이용하여 EGFP 농도를 계산하였다. Extinction coefficient assay는 EGFP의 몰흡광계수와 Lambert-Beer's Law를 이용하여 488nm에서 EGFP 농도를 직접 계산하였다. 두 방법의 ...2025.01.02
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[생화학실험] A+, 세포파쇄 및 단백질 정량법 실험2025.01.031. 세포막 구조 동·식물(진핵세포)의 세포막은 단백질과 인지질로 구성된 이중막 구조이며, 박테리아(원핵세포)의 세포막도 이와 유사한 구조를 가지고 있다. 단백질은 온도, pH 등의 요인에 의해 구조와 기능이 변화할 수 있다. 2. 세포 파쇄 방법 세포막을 파쇄하여 세포 내 단백질 및 대사체를 안정적으로 추출하는 다양한 방법이 있다. 초음파 파쇄, 칼날 분쇄, 막자와 막자사발 분쇄, 효소 파쇄, 삼투압 파쇄, 알칼리 처리, 압착법 등이 있으며 각각의 원리와 특징이 다르다. 3. 단백질 추출 및 정량 단백질은 온도, pH 등의 요인에...2025.01.03
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Lowry-Folin법을 이용한 단백질 정량 (생화학 실험)2025.01.161. 단백질 정량 실험 목적은 Lowry 방법으로 수용액에 녹아 있는 단백질의 양을 정량하는 것입니다. 이를 위해 표준 용액을 이용한 표준 곡선의 작성과 비색정량법을 습득합니다. Lowry 단백질 분석법은 강알칼리 조건에서 구리 이온과 펩타이드 결합의 반응, 그리고 Folin-Ciocalteu 시약과의 반응을 통해 단백질을 정량합니다. 이 방법은 트립토판, 시스테인, 티로신 등의 아미노산과 반응하여 발색되는 원리를 이용합니다. 2. 분광광도법 분광광도법은 물질에 의한 빛의 흡수 현상을 이용하여 화학물질의 양을 정량하는 방법입니다. ...2025.01.16
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BCA assay 정량2025.01.241. BCA assay BCA assay는 단백질 정량 방법 중 하나로, 구리 이온이 단백질과 반응하여 발색하는 원리를 이용합니다. A 용액과 B 용액을 50:1 비율로 섞어 사용하며, 표준 단백질 농도를 0, 0.125, 0.25, 0.5, 1, 2 ug/ml로 준비하여 흡광도를 측정합니다. 이를 통해 샘플의 단백질 농도를 계산할 수 있습니다. 샘플 버퍼, 단백질 양, 용해 버퍼의 양 등을 고려하여 western blotting 실험에 사용할 수 있습니다. 1. BCA assay The BCA (Bicinchoninic Acid)...2025.01.24
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식품의 조단백 정량분석(Micro-Kjeldahl 법[붕산법])2025.01.241. 식품 조단백 정량분석 식품의 단백질 함량을 측정하는 것은 식품의 품질을 결정하는 중요한 요인이다. 이 실험에서는 Micro-Kjeldahl 법(붕산법)을 사용하여 쌀귀리의 조단백 함량을 측정하였다. 실험 과정에는 분해, 증류, 중화, 적정의 4단계가 포함되며, 분해 과정에서 발생하는 유해 가스는 Scrubber를 통해 중화시켰다. 실험 결과, 쌀귀리의 조단백 함량은 11.86±0.04%로 나타났으며, 신뢰수준은 99.62%로 높은 신뢰도를 보였다. 1. 식품 조단백 정량분석 식품 조단백 정량분석은 식품 성분 분석에 있어 매우 ...2025.01.24
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Cell harvest and protein assay2025.01.231. Cell harvest 세포 배양 시 adherent cell과 suspension cell로 구분할 수 있으며, adherent cell을 harvest하는 방법에는 화학적 방법(trypsin, accutase 사용)과 물리적 방법(scraper 사용)이 있다. 이번 실험에서는 물리적 방법인 scraper를 사용하여 adherent cell을 harvest하였다. 2. Protein extraction 세포 내 단백질을 추출하기 위해 lysis buffer와 phosphatase/protease inhibitor를 사용하여 ...2025.01.23
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Lowry-Folin법을 이용한 단백질 정량2025.01.231. 단백질 정량 이 실험의 목적은 Lowry-Folin법을 이용하여 수용액에 녹아있는 단백질을 정량하고 흡광도 그래프를 그리는 방법을 익히는 것입니다. 실험 방법에는 BSA 표준곡선 작성, 미지의 단백질 시료 측정, 흡광도 측정 및 분석 등의 단계가 포함되어 있습니다. 2. Lowry-Folin법 Lowry-Folin법은 단백질 정량에 널리 사용되는 방법으로, 구리 이온과 단백질의 반응을 통해 청색 발색 반응이 일어나는 원리를 이용합니다. 이 실험에서는 BSA 표준용액을 이용하여 표준곡선을 작성하고, 미지의 단백질 시료의 농도를 ...2025.01.23
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