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[생화학실험] A+, 세포파쇄 및 단백질 정량법 실험2025.01.031. 세포막 구조 동·식물(진핵세포)의 세포막은 단백질과 인지질로 구성된 이중막 구조이며, 박테리아(원핵세포)의 세포막도 이와 유사한 구조를 가지고 있다. 단백질은 온도, pH 등의 요인에 의해 구조와 기능이 변화할 수 있다. 2. 세포 파쇄 방법 세포막을 파쇄하여 세포 내 단백질 및 대사체를 안정적으로 추출하는 다양한 방법이 있다. 초음파 파쇄, 칼날 분쇄, 막자와 막자사발 분쇄, 효소 파쇄, 삼투압 파쇄, 알칼리 처리, 압착법 등이 있으며 각각의 원리와 특징이 다르다. 3. 단백질 추출 및 정량 단백질은 온도, pH 등의 요인에...2025.01.03
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식품의 조단백 정량분석(Micro-Kjeldahl 법[붕산법])2025.01.241. 식품 조단백 정량분석 식품의 단백질 함량을 측정하는 것은 식품의 품질을 결정하는 중요한 요인이다. 이 실험에서는 Micro-Kjeldahl 법(붕산법)을 사용하여 쌀귀리의 조단백 함량을 측정하였다. 실험 과정에는 분해, 증류, 중화, 적정의 4단계가 포함되며, 분해 과정에서 발생하는 유해 가스는 Scrubber를 통해 중화시켰다. 실험 결과, 쌀귀리의 조단백 함량은 11.86±0.04%로 나타났으며, 신뢰수준은 99.62%로 높은 신뢰도를 보였다. 1. 식품 조단백 정량분석 식품 조단백 정량분석은 식품 성분 분석에 있어 매우 ...2025.01.24
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재결합 단백질의 발현/ Expression of recombinant proteins in E. coli2025.01.121. GST-tagged Proteins glutathione S-transferase (GST), histidine (HIS), 기타 친화성 태그를 이용하여 단백질을 정제하게 되면 기존에 잘 알려진 생화학적 특성을 가진 단백질과 알려지지 않은 생화학적 특성을 가진 재조합 단백질의 N 말단에 결합하여 정제를 도와준다. GST 단백질은 번역 시에 안정적이고 가용성이 높은 단백질로 빠르게 접히기 때문에, GST 태그를 포함하면 태그가 없을 때보다 더 잘 발현하고 용해도를 촉진하는 경우가 많다. 2. BCA assay BCA는 Lowry...2025.01.12
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생명과학 보고서_SDS-PAGE & Western blot(아주대 전공실험2)2025.05.161. SDS-PAGE SDS-PAGE는 단백질을 분자량에 따라 분리하는 기법으로, 단백질 시료에 SDS를 처리하여 단백질의 3차 구조를 풀어 선형화시킨 후 전기영동을 통해 분리한다. SDS는 단백질에 결합하여 음전하를 띠게 하므로, 단백질은 분자량에 비례하여 양극으로 이동하게 된다. 이를 통해 복잡한 단백질 혼합물을 효과적으로 분리할 수 있다. 2. Western blot Western blot은 특정 단백질의 유무 또는 양을 확인하는 분석 방법이다. 전기영동으로 분리된 단백질을 membrane에 전이시킨 후, 표적 단백질에 특이적...2025.05.16
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미지 시료의 단백질 정량 - Kjeldahl method 활용2025.05.101. 단백질 정량 본 실험에서는 Kjeldahl method를 사용하여 미지의 시료(Rat 사료, 2g)에 함유된 질소를 정량하고, 이를 단백질량으로 환산하여 시료 중의 단백질량을 알아내었다. 실험 결과 시료의 조단백질 함량은 18.82%로 나타났다. Kjeldahl 기구의 각 부위에서 일어나는 화학적 반응(분해, 증류, 중화, 적정)도 고찰하였다. 2. 단백질 정량법 단백질 정량법에는 세미마이크로킬달법, 홀몰적정법, 반스라이크법 등이 있으며, 본 실험에서는 semi-micro kjeldahl 법을 사용하였다. 이 방법은 시료 내 ...2025.05.10
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일반생물학실험 결과레포트 [실험9] 핵산과 단백질 정량2025.05.131. 핵산 정량 실험을 통해 추출한 plasmid DNA의 농도를 spectrophotometer로 측정하였다. 측정 결과 DNA 농도는 52.00ug/ml로 나타났다. DNA의 순도를 확인하기 위해 A260/A280과 A260/A230 비율을 계산하였다. A260/A280 비율은 2.080으로 순수한 DNA 범위인 1.8-2.0을 벗어나 있어 DNA가 손상되었거나 오염되었음을 알 수 있다. A260/A230 비율은 0.881로 순수한 DNA 범위인 2.0-2.2를 크게 벗어나 있어 EDTA, 탄수화물, 유기용매 등의 오염이 있는 ...2025.05.13
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[생화학실험]단백질 정량(Lowry 법)2025.05.041. 단백질 정량(Lowry법) Lowry법은 알칼리성에서 단백질의 peptide 결합과 구리가 반응하여 Cu^{2+} 이온을 생성하는 Biuret 반응의 원리를 이용한 것이다. Cu^{2+} 이온은 방향족 아미노산의 산화를 유도하여 phospomolybdotungstate를 푸른색의 heteropolymolybdnum으로 환원시켜 강한 푸른색을 생성한다. 이 방법은 단백질의 농도가 0.01～1.0㎎/㎖의 경우에 측정 가능하다. 2. Biuret 반응 두 개 이상의 펩티드 결합을 갖는 화합물들은 알칼리성 용액에서 황산구리로 처리하면...2025.05.04
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서강대학교 일반생물학실험1 실험 6. GFP 단백질과 단백질 정량 (Protein Measurements)2025.01.021. 단백질 정량 방법 실험에서는 Lowry assay와 Extinction coefficient assay 두 가지 단백질 정량 방법을 사용하여 EGFP의 질량농도를 측정하였다. Lowry assay는 Biuret reaction과 Folin reaction을 거쳐 750nm에서 흡광도를 측정하고 BSA 표준곡선을 이용하여 EGFP 농도를 계산하였다. Extinction coefficient assay는 EGFP의 몰흡광계수와 Lambert-Beer's Law를 이용하여 488nm에서 EGFP 농도를 직접 계산하였다. 두 방법의 ...2025.01.02
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Bradford법을 이용한 단백질의 정량 분석2025.01.151. 단백질 정량 분석 실험 목적은 Bradford법을 이용하여 단백질 정량을 하고 Standard curve를 그리는 것입니다. Bradford법은 산성용액에서 Coomassie brilliant blue 염료가 단백질과 결합하여 최대 흡광도가 595 ㎚로 이동하는 원리를 이용합니다. 따라서 595 ㎚에서의 흡광도가 단백질 농도와 비례합니다. 이 방법은 빠르고 비단백질성분들에 의한 방해도 거의 없어 실험실에서 가장 자주 사용하는 단백질 정량법입니다. 2. 단백질 정량의 중요성 단백질 정량은 생화학 실험에서 기본이 되는 과정입니다....2025.01.15
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Lowry-Folin법을 이용한 단백질 정량2025.01.231. 단백질 정량 이 실험의 목적은 Lowry-Folin법을 이용하여 수용액에 녹아있는 단백질을 정량하고 흡광도 그래프를 그리는 방법을 익히는 것입니다. 실험 방법에는 BSA 표준곡선 작성, 미지의 단백질 시료 측정, 흡광도 측정 및 분석 등의 단계가 포함되어 있습니다. 2. Lowry-Folin법 Lowry-Folin법은 단백질 정량에 널리 사용되는 방법으로, 구리 이온과 단백질의 반응을 통해 청색 발색 반응이 일어나는 원리를 이용합니다. 이 실험에서는 BSA 표준용액을 이용하여 표준곡선을 작성하고, 미지의 단백질 시료의 농도를 ...2025.01.23
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