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임상화학 기기분석법 보고서2025.01.021. Ion-exchange chromatography (이온교환크로마토그래피) 이온 교환 크로마토그래피(Ion Exchange Chromatography, IEC)는 전하 차이를 이용하여 화학종을 분리하는 방법입니다. 양이온은 양이온-교환물질(교환체)에, 음이온은 음이온-교환물질에 의해 분리됩니다. 이온교환크로마토그래피는 원하지 않는 이온을 제거하고 원하는 이온을 농축하는 데 사용됩니다. 2. HPLC(High perfomance liquid chromatography, 고속액체크로마토그래피) HPLC는 고압 또는 고속액체크로마토...2025.01.02
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단백질의 분리2025.01.231. 단백질 분리 실험을 통해 원심분리를 이용하여 세포 내 단백질을 분리하는 방법을 익혔다. 단백질 분리를 위해 세포를 깨고 RIPA 버퍼에 녹인 후 원심분리하여 상층액을 얻었다. 이 상층액에는 세포에서 추출된 단백질이 포함되어 있다. 2. SDS-PAGE SDS-PAGE는 단백질의 크기에 따라 분리하는 기법으로, 단백질이 SDS에 의해 변성되어 전하/분자량 비율이 동일해지면 전기장 내에서 크기에 따라 이동속도가 달라져 분리된다. 이를 통해 단백질의 분자량을 확인할 수 있다. 3. 세포 용해 세포를 깨는 방법에는 homogeniza...2025.01.23
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Clostridium perfringens와 Western blotting2025.05.131. Clostridium perfringens Clostridium perfringens는 식중독을 일으키는 균으로, 4개의 exotoxin을 만들어 내며 그 중 enterotoxin이 가장 중요하다. 이 enterotoxin은 열에 약해 60°C에서 10분이면 불활성화 되지만, 영양세포가 아닌 sporulation 과정에서 발현된다. 오염된 음식이나 변에서 발견될 수 있으며, 제대로 조리되지 않은 음식을 섭취할 경우 식중독이 발생한다. 2. Western blotting Western blotting은 단백질을 크기별로 분리하여...2025.05.13
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IP (Immunoprecipitation)2025.01.231. IP (Immunoprecipitation) 실험주제는 IP (Immunoprecipitation)입니다. IP 기법은 항체를 이용하여 목적 단백질을 침강시켜 분리하는 실험 기법입니다. 실험에서는 FLAG 태그가 붙은 A 단백질을 발현시키고 IP 기법을 통해 분리하였습니다. Western blotting 결과에서 110kDa 부근에서 FLAG-A 단백질이 검출되었고, 50kDa와 26kDa 부근에서는 heavy chain과 light chain이 검출되었습니다. 또한 70kDa 부근에서 non-specific하게 반응된 단백질...2025.01.23
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Protein Electro-transfer and Western blot2025.01.231. Western blotting Western blotting은 단백질에 대한 blotting 기술을 뜻하며, 항원-항체 반응을 이용한다. 단백질 혼합물을 polyacrylamide gel에서 SDS-PAGE를 이용하여 크기에 따라 분리하고 membrane으로 electro-transfer하여 흡착시킨 후 membrane 표면에서 항체를 이용하여 원하는 단백질의 존재를 확인하는 전반적인 과정을 의미한다. 2. SDS의 역할 및 원리 SDS-PAGE는 SDS가 단백질에 일정 간격으로 결합하여 charge density를 일정하게 ...2025.01.23
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생명과학실험1 단백질 정제 및 기능 분석을 위한 DEAE sepharose anion exchange chromatography2025.01.171. 단백질 정제 이 실험에서는 E.coli에서 추출한 alkaline phosphatase(AP) 단백질을 DEAE sepharose anion exchange chromatography를 이용하여 정제하는 과정을 다루고 있습니다. AP는 E.coli의 outer membrane과 inner membrane 사이에 존재하는 periplasmic space에 위치하며, osmotic shock을 통해 추출할 수 있습니다. 추출된 AP 단백질 혼합물은 열처리, 투석, ion exchange chromatography 등의 과정을 거쳐...2025.01.17
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Gel 제조 (SDS-PAGE 실험을 위한 사전 준비) 보고서2025.01.131. 전기영동 전기영동은 DNA와 단백질과 같은 생체 고분자들을 분리 및 정제하는 방법입니다. 전기영동 원리는 음전하를 띄고 있는 생체고분자(DNA/단백질)들에게 전기적 힘(-음전하 ->＋양전하)을 가해주어, 물질이 사이즈에 따라 분리되는 것입니다. DNA 전기영동과 단백질 전기영동(SDS-PAGE)의 차이는 DNA는 음전하를 띄고 있어 Agarose(한천) Gel에서 관찰할 수 있지만, 단백질은 양, 음전하를 갖고 있어 SDS-sample buffer와의 혼합이 필요하며 Poly Acrylamide gel에서 관찰할 수 있습니다....2025.01.13
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Protein electro-transfer and Western blot 실험보고서2025.01.161. Western blot Western blot은 찾고자 하는 protein의 antigen epitope와 반응하는 antibody를 이용하여 단백질 혼합물 중에서 원하는 단백질(antigen)을 찾아내는 방법이다. 전기 영동을 이용하여 단백질을 gel 상에서 크기에 따라 분리한 후, membrane에 transfer한다. Membrane에 발광하는 probe가 붙어 있는 antibody를 붙여주는 항원-항체 반응을 이용하여 찾고자 하는 특정 단백질을 검출한다. 2. Nitrocellulose membrane Nitrocell...2025.01.16
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면역학 SDS-PAGE 실험 레포트2025.01.031. SDS-PAGE SDS-PAGE는 단백질 분리 기술로, 전기 영동 이동성을 이용한 기술입니다. SDS는 단백질에 결합하여 일시적으로 음전하를 띄게 하고, 분자량에 따라 각각의 단백질을 분리할 수 있습니다. SDS-PAGE는 stacking gel과 running gel로 구성되어 있으며, 이온들의 이동속도 차이로 인해 단백질들이 동일한 속도로 내려가게 됩니다. 이를 통해 단백질의 유무와 분자량을 확인할 수 있습니다. 2. Coomassie Blue Staining Coomassie Brilliant Blue G250은 단백질을...2025.01.03
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[이화여대 생명과학실험1 분반1등 A+ 레포트] Immunoprecipitation2025.01.211. Immunoprecipitation Immunoprecipitation(IP)은 antigen-antibody interaction을 이용해 sample 용액으로부터 원하는 단백질을 분리하는 실험 기법입니다. 여러 가지 단백질이 섞인 용액에서 특정 단백질만을 분리하고 싶을 경우, 해당 단백질에 specific 하게 결합하는 antibody를 표지로 삼아 이를 얻을 수 있습니다. 만약 target 단백질과 specific 하게 결합하는 antibody가 존재하지 않을 경우, 해당 단백질에 다른 단백질을 tagging 하여 이를 ...2025.01.21
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