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[생화학실험] (A+) Isolation and characterization of bovine Milk a-Lactalbumin 예비 결과레포트2025.05.031. 우유의 구성 성분 우유는 87.4%의 물과 4.8%의 유당(lactose), 3.4%의 단백질, 0.7%의 미네랄로 구성되어 있다. 단백질은 카제인(casein)과 α-Lactalbumin, β-Lactoglobulin, immunoglobulins 등으로 이루어져 있다. 2. α-Lactalbumin의 특성 α-Lactalbumin은 유청 단백질(whey)의 한 종류로, 분자량이 약 14,200 Da이며 123개의 아미노산과 4개의 disulfide bridges로 구성되어 있다. 우유에 평균 1 mg/mL의 농도로 존재하며...2025.05.03
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Protein Electro-transfer and Western blot2025.01.231. Western blotting Western blotting은 단백질에 대한 blotting 기술을 뜻하며, 항원-항체 반응을 이용한다. 단백질 혼합물을 polyacrylamide gel에서 SDS-PAGE를 이용하여 크기에 따라 분리하고 membrane으로 electro-transfer하여 흡착시킨 후 membrane 표면에서 항체를 이용하여 원하는 단백질의 존재를 확인하는 전반적인 과정을 의미한다. 2. SDS의 역할 및 원리 SDS-PAGE는 SDS가 단백질에 일정 간격으로 결합하여 charge density를 일정하게 ...2025.01.23
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이화여대 생명과학실험 A+ 리포트(DEAE sepharose anion exchange chromatography)2025.01.231. Column chromatography 크로마토그래피는 주어진 시료 중 정량 분석하고자 하는 성분을 분리하고 확인하는 수단으로, 여러 다른 화합물들이 상이한 두 가지 phases 간에 분포되어 있거나 어느 물질 내의 분리 가능한 부위들 사이에 분포되어 있을 때 그 분포된 정도가 화합물들끼리 서로 다르다는 사실에 기초한 방법이다. 한 가지 상은 정지상(stationary phase)이고 다른 상은 이동상(mobile phase)이다. 이동상은 정지상을 일고 있는 물질 위로 흐르는데, 분리될 시료는 이 이동상을 따라 운반된다. 시...2025.01.23
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Clostridium perfringens와 Western blotting2025.05.131. Clostridium perfringens Clostridium perfringens는 식중독을 일으키는 균으로, 4개의 exotoxin을 만들어 내며 그 중 enterotoxin이 가장 중요하다. 이 enterotoxin은 열에 약해 60°C에서 10분이면 불활성화 되지만, 영양세포가 아닌 sporulation 과정에서 발현된다. 오염된 음식이나 변에서 발견될 수 있으며, 제대로 조리되지 않은 음식을 섭취할 경우 식중독이 발생한다. 2. Western blotting Western blotting은 단백질을 크기별로 분리하여...2025.05.13
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전기영동 결과보고서2025.01.121. 전기영동 전기영동은 DNA, RNA, 단백질 등의 생물학적 거대분자를 분리하는 데 사용되는 기술입니다. 이번 실험에서는 Agarose gel을 사용하여 PCR 증폭 산물을 전기영동으로 분리하였습니다. 전기영동 과정에서 주의해야 할 점으로는 TAE 완충액의 적절한 양 유지, 전기영동 시간 관리, 시료 주입 시 gel 판 손상 방지 등이 있습니다. 또한 Polyacrylamide gel을 사용하는 실험도 있으며, 이는 단백질 분리나 작은 크기의 DNA 분리에 주로 사용됩니다. 2. PCR PCR(Polymerase Chain Re...2025.01.12
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IP (Immunoprecipitation)2025.01.231. IP (Immunoprecipitation) 실험주제는 IP (Immunoprecipitation)입니다. IP 기법은 항체를 이용하여 목적 단백질을 침강시켜 분리하는 실험 기법입니다. 실험에서는 FLAG 태그가 붙은 A 단백질을 발현시키고 IP 기법을 통해 분리하였습니다. Western blotting 결과에서 110kDa 부근에서 FLAG-A 단백질이 검출되었고, 50kDa와 26kDa 부근에서는 heavy chain과 light chain이 검출되었습니다. 또한 70kDa 부근에서 non-specific하게 반응된 단백질...2025.01.23
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전기영동을 이용한 단백질의 관찰(생화학실험)2025.01.161. 전기영동 전기영동은 전극 사이의 전기장 하에서 용액 속의 전하가 반대 전하의 전극을 향하여 이동하는 화학현상이다. 겔 전기영동법은 전기영동 현상을 단백질 분석에 응용한 초기 형태로, 단백질 크기에 따라 분리가 가능하다. 전기영동 실험에서는 SDS 처리를 통해 단백질의 전하를 균일하게 만들어 오직 크기에 따른 분리가 이루어지도록 한다. 또한 isoelectric focusing과 2D 전기영동법 등 다양한 전기영동 기법이 있다. 2. 겔 제조 겔은 acrylamide와 bisacrylamide를 혼합하여 중합 반응을 통해 만든다...2025.01.16
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Protein electro-transfer and Western blot 실험보고서2025.01.161. Western blot Western blot은 찾고자 하는 protein의 antigen epitope와 반응하는 antibody를 이용하여 단백질 혼합물 중에서 원하는 단백질(antigen)을 찾아내는 방법이다. 전기 영동을 이용하여 단백질을 gel 상에서 크기에 따라 분리한 후, membrane에 transfer한다. Membrane에 발광하는 probe가 붙어 있는 antibody를 붙여주는 항원-항체 반응을 이용하여 찾고자 하는 특정 단백질을 검출한다. 2. Nitrocellulose membrane Nitrocell...2025.01.16
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SDS PAGE 실험보고서2025.05.041. SDS PAGE SDS PAGE란 Sodium Dodecyl Sulphate -Polyacrylamide Gel Electrophoresis의 줄임말로써, PAGE는 전기영동법을 지칭하는 말로서 사용되기도 하고, 때로는 겔 자체를 지칭하기도 한다. 이를 사용한 전기 영동법 역시 기본적 원리는 한천을 이용한 것과 같다. 허나 폴리아크릴아마이드 겔은 한천 겔에 비해 훨씬 촘촘한 다공성 물질이기 때문에 한천을 이용할 때에 비해 분자량이 작고 크기 차이가 작은 시료들을 분리할 때 이용한다. 따라서 또다른 고분자 물질이지만 핵산에 비해...2025.05.04
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A+ 생화학실험 <13주차. His6-tagged Protein Purification> 레포트2025.01.201. 단백질 정제 단백질 정제(Protein Purification)는 생물학적 연구 및 산업적 응용을 위하여 단백질을 혼합물로부터 분리하고 정제하는 과정이다. 이 과정은 일반적으로 여러 단계를 거치며, 각 단계에서는 단백질의 용해도, 크기, 전하, 결합 친화도 등의 단백질 간 서로 다른 특성을 활용하여 단백질을 분리한다. 첫 번째 단계는 세포 용해(Cell Lysis)로, 세포벽을 파괴하여 세포 내의 단백질을 방출하는 것이다. 다음 단계는 affinity chromatography이다. 이 방법은 특정 단백질에 결합하는 리간드를 ...2025.01.20
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