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plasmid DNA 추출과 전기영동2024.10.061. 개요 1.1. Plasmid DNA의 정의와 특성 Plasmid DNA는 세균을 비롯한 많은 생물체에서 염색체 외부에 존재하는 고리형태의 이중나선 구조의 DNA 조각이다. 일반적으로 크기가 상대적으로 작고 자체적인 복제 능력을 가지고 있어 유전자 클로닝 등의 유전공학 분야에서 매우 유용한 벡터로 활용된다. Plasmid DNA는 대표적인 에피솜 DNA로, 크기가 1~1000 kilobase pairs 정도로 매우 다양하다. 세균 세포 내에서 염색체와는 별개로 독립적으로 존재하며, 일반적으로 세균의 생존에 필수적이지는 않지만...2024.10.06
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전기영동2024.10.111. 전기영동을 통한 DNA 분석 1.1. 전기영동의 원리 전기영동의 원리는 다음과 같다. 전기영동은 전기장 안에서 하전된 입자가 양극 또는 음극으로 이동하는 현상을 이용한 기술이다. 이동하는 속도는 입자의 전하량, 크기와 모양, 용액의 pH와 점성도, 용액에 있는 다른 전해질의 농도와 이동의 세기, 지지체의 종류 등 여러 요인에 따라 달라진다. 즉, 분자 자체의 성질에 따라 이동 속도가 결정된다. 전기영동법은 아미노산, 뉴클레오타이드, 단백질과 같은 하전된 물질을 분리하거나 분석하는데 매우 효과적으로 사용된다. 아가로스 젤은 완...2024.10.11
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생명과학실험 DNA 및 플라스미드 정제 예비보고서2024.10.091. 플라스미드 DNA 정제 1.1. 플라스미드의 특성 플라스미드는 박테리아 세포의 염색체와는 별도로 존재하며 독자적인 복제가 가능한 원형의 DNA 분자이다. 플라스미드는 보통 30개 이하의 적은 수의 유전정보를 가지고 있어 염색체 DNA에 비해 크기가 매우 작다. 플라스미드는 세균 세포 내에서 독립적으로 복제될 수 있는데, 이는 플라스미드가 자체적인 복제 기작을 가지고 있기 때문이다. 플라스미드는 세균 세포에서 생명 유지에 필수적이지는 않지만 때로는 생존에 도움을 줄 수 있다. 대표적인 예로, 플라스미드가 항생제 내성 유전자...2024.10.09
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생명과학 실험 플라스미드 DNA 정제2024.10.091. 실험 개요 1.1. 실험 목적 Plasmid DNA의 원형을 유지하려는 구조적 특성을 이용하며 alkaline lysis prep method를 이용하여 plasmid DNA를 분리해본다. DNA Purification을 한 후 Agarose gel 전기영동을 통해 DNA를 크기별로 분리하여 확인한다. 1.2. 실험 원리 플라스미드(Plasmid)는 DNA에 존재하는 유전자 정보 중 염색체(chromosome) DNA와는 별도로 독립적으로 복제되는 대표적인 에피솜(episome) DNA 분자이다. 플라스미드 DNA는 일반적으...2024.10.09
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플라스미드 재조합2024.11.111. 플라스미드 재조합 이론과 방법 1.1. 목적 PCR로 증폭된 DNA를 플라스미드 벡터에 삽입을 한 후 competent cell을 형질전환을 시키는 것이 이 실험의 목적이다. 이를 통해 재조합 플라스미드를 대량으로 증폭하여 유전자 재조합 기술을 이용한 단백질 대량 생산 등의 응용을 목표로 하고 있다. 1.2. 실험 재료 TA Cloning에 사용되는 실험 재료는 다음과 같다. PCR product 5ul, Ligase 1ul, Ligase buffer 7.5ul, T-vector, DW 2.5ul, 원심분리기이다. Compe...2024.11.11
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특정 유전자를 선택하여 T-Vector에 삽입시키고 이를 E-Coli 내에 transformation 시켜 형질전환 박테리아를 선택적으로 배양2024.11.171. 형질전환(Transformation) 1.1. 개념 및 원리 1.1.1. 형질전환의 정의 형질전환(transformation)이란 세포가 외부 DNA를 받아들여 자신이 갖고 있던 DNA와 결합함으로써 세포의 유전형질에 변화가 나타나는 현상을 말한다. 이러한 형질전환은 세균에서 흔히 관찰되며, 인공적인 유전자 조작을 통해 이루어질 수도 있다. 어떤 세포가 외부의 DNA를 받아들일 수 있는 생리적 상태에 있는 것을 '유능(Competent)'하다고 하며 그러한 상태를 '유능성(Competence)'이라고 한다. 원래 자연스...2024.11.17
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서강대학교 일반생물학 Plasmid DNA 제한효소 절단2024.12.011. 플라스미드 DNA 1.1. 플라스미드 DNA 개요 플라스미드는 박테리아 또는 일부 유핵생물에 존재하는 DNA 분자로, 염색체와는 독립적으로 존재하며 자가복제가 가능한 작은 원형 DNA 분자이다. 플라스미드는 일반적으로 박테리아 염색체 DNA와는 별개의 유전체를 가지고 있으며, 세포 증식 및 대사에 필수적이지 않지만 항생제 내성 유전자나 특정 물질 분해 유전자 등을 가지고 있어 숙주 생명체에 유익한 역할을 한다. 플라스미드는 박테리아 세포 내에서 다수 복제가 가능하기 때문에, 관심 유전자를 증폭하여 얻는데 유용하게 사용될 ...2024.12.01
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현대생물학실험22024.10.311. 플라스미드 클로닝과 발현 1.1. TA 클로닝 및 형질전환 TA 클로닝은 PCR을 거친 product의 3'에 존재하는 A overhang과 T vector의 3'의 T overhang의 상보성으로 인해 클로닝을 진행하는 방법이다. 이 과정에서 DNA strand의 3'-OH 그리고 5'-P 사이의 phosphodiester bond를 형성하게 되어 ligation을 진행한다. ligation이 완료된 플라스미드 DNA를 DH5α에 주입하여 Transformation을 통해 DH5α의 유전형질을 새롭게 변환시킨다. Lac o...2024.10.31
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단국대 세포생물학22024.10.191. 일반생물학 실험 결과리포트 1.1. 플라스미드 준비 및 효소 절단 E.coli 균에 존재하는 플라스미드 DNA를 알칼리 용해 방법(alkaline lysis method) 혹은 편의성을 위해 나온 분리 키트 제품으로 분리하는 것이다. 플라스미드는 대장균에 형질전환시켜 도입한 후, 이 대장균을 순수배양하여 증폭하고, 이를 손쉽게 플라스미드를 분리하여 정제할 수 있다. 염색체 DNA와 분리하는 핵심원리는 변성된 DNA가 renaturation(annealing)되는 속도의 차이를 이용한 것이다. 염색체 DNA처럼 크거나 분리과정...2024.10.19
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일반생물학실험 플라스미드 DNA 추출2024.11.241. 플라스미드 DNA 추출 1.1. 실험 목적 Alkaline lysis (denaturation) method에 대해 알아보고 이 방법을 통해 플라스미드 DNA를 추출해보는 것이 이 실험의 목적이다""DNA Mini prep이란 말을 쓰는데 prep은 'prepartion'의 줄임말로 DNA를 소량으로 추출한다는 의미이다. plasmid를 추출하는 방법으로는 기본적으로 여러가지가 있지만 그 가운데 대표적인 방법으로 alkaline lysis (denaturation) method가 이용되고 있다. 세포내에 DNA는 일반적인 d...2024.11.24
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