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Induction sds2024.10.171. 단백질 발현 분석 1.1. 실험 개요 실험 개요는 단백질 발현 분석을 위한 전반적인 실험 과정을 설명한다. 이 실험은 대장균(E. coli)에서 특정 유전자를 발현시켜 단백질을 생산하고, SDS-PAGE를 통해 발현된 단백질을 확인하는 것이 주요 목적이다. 우선, 대장균 세포에 목적 유전자가 도입된 발현 벡터를 형질전환하여 균주를 만든다. 이 균주를 배양하면서 IPTG를 처리하여 Lac operon 시스템을 활성화시켜 단백질 발현을 유도한다. 발현된 단백질은 세포 용해 과정을 거쳐 추출하고, SDS-PAGE를 통해 단백질...2024.10.17
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특정 유전자를 선택하여 T-Vector에 삽입시키고 이를 E-Coli 내에 transformation 시켜 형질전환 박테리아를 선택적으로 배양2024.11.171. 형질전환(Transformation) 1.1. 개념 및 원리 1.1.1. 형질전환의 정의 형질전환(transformation)이란 세포가 외부 DNA를 받아들여 자신이 갖고 있던 DNA와 결합함으로써 세포의 유전형질에 변화가 나타나는 현상을 말한다. 이러한 형질전환은 세균에서 흔히 관찰되며, 인공적인 유전자 조작을 통해 이루어질 수도 있다. 어떤 세포가 외부의 DNA를 받아들일 수 있는 생리적 상태에 있는 것을 '유능(Competent)'하다고 하며 그러한 상태를 '유능성(Competence)'이라고 한다. 원래 자연스...2024.11.17
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단백질 정제 및 발현에서 cell lysis와 sonication 보고서를 써줘2024.10.131. 단백질 정제 1.1. 실험배경 1.1.1. 재조합 단백질 발현 재조합 단백질 발현이란 외부 유전자를 플라스미드 벡터에 삽입한 후, 이를 숙주세포에 도입하여 단백질을 발현하는 기법이다. 이를 통해 내생적 단백질에 비해 훨씬 높은 양의 단백질을 생산할 수 있으며, 정제 및 검출을 위한 태그(tag)를 부착할 수 있다는 장점이 있다. 재조합 단백질 발현 실험에서 사용되는 pET28a 벡터는 kanamycin 항생제에 대한 저항성 유전자인 KanR을 갖고 있다. 따라서 배양액에 kanamycin을 첨가하면 KanR을 갖고 있는 ...2024.10.13
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SDS page2025.03.271. SDS PAGE의 원리 1.1. SDS PAGE 정의 및 특징 SDS PAGE는 Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis의 약어로, 단백질을 분리해내는 기술이다. 주로 내분비학, 유전학, 생화학, 분자생물학 등 단백질을 연구하는 학문에 많이 사용되며, 전기영동 이동성을 이용하여 단백질을 분리한다. 단백질의 전기영동 이동성은 polypeptide sequence의 길이, 분자량, 3차원 접힘 구조 등의 요인에 의해 나타나는 특성이다. 핵산 전기영동에서는 agaros...2025.03.27
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SDS page2025.03.271. SDS PAGE 1.1. SDS PAGE의 정의와 특징 SDS PAGE(Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis)는 단백질을 분리해내는 기술로, 전기영동 이동성을 이용하는 방법이다. 단백질을 구성하는 아미노산 서열의 길이, 분자량, 3차원 접힘 구조 등의 요인에 따라 나타나는 전기적 이동 특성을 이용하여 단백질을 분리할 수 있다. 핵산 전기영동에는 주로 아가로스 겔을 사용하지만, 단백질 전기영동에는 폴리아크릴아마이드 겔을 사용한다. 아크릴아마이드 단량체와 교차결합...2025.03.27
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SDS page2025.03.151. SDS PAGE 1.1. SDS PAGE 개요 SDS PAGE는 단백질을 분리하는 기술이다. 핵산을 전기영동할 때는 아가로스 겔을 주로 이용하지만, 단백질 전기영동에는 폴리아크릴아마이드 겔을 사용한다. 아크릴아마이드 단량체가 ammonium persulfate와 TEMED 효소의 촉매 반응을 통해 폴리아크릴아마이드로 중합되어 겔 구조를 형성한다. 이 반응은 효소 촉매 반응이므로 비가역적이다. SDS는 음이온성 계면활성제로, 단백질과 비가역적으로 결합하여 균일한 음전하를 띠게 한다. 이로써 단백질의 고유한 전하와 입체 구조...2025.03.15
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생화학실험 단백질 정량 분석 BCA2025.03.121. 단백질 정량 분석 - BCA법 & SDS-PAGE 분석 & Western Blot 1.1. 실험 목적 BCA 분석법을 이용한 단백질 정량 분석 실험 목적은 BCA 법을 활용하여 우유 중의 단백질 함량을 분석하고, SDS-PAGE와 Coomassie Blue 염색을 통해 단백질의 전기영동 결과를 관찰한 것을 바탕으로 Western Blot을 시행하여 membrane에 transfer시켜 항원-항체 반응을 이용하여 특정한 단백질의 정량 분석과 검출하는 방법을 실험을 통해 숙지하는 것이다. BCA 분석법은 단백질이 구리 이온(...2025.03.12
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연세대학교 레포트 표지2025.03.221. 연세대학교 레포트 표지 본 레포트는 Lab1에서 실험기본장치, Lab2에서 세포배양, Lab3-5에서 gene 관련 실험을 진행했다. Lab4에서는 특정 gene을 E.coli에 translation시켜 target gene을 복제하였다. 이 gene을 2가지 방법으로 활용할 수 있는데, 첫째는 gene 자체로만 활용하는 것이고, 둘째는 gene에 의해 발현된 protein을 활용하는 것이다. 본 레포트에서는 protein isolation을 다루며, 추가적으로 standard curve를 이용한 protein 농도 측정 방법...2025.03.22
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분자세포생물학 실험 보고서: Bradford Assay 및 Western Blot 원리2024.10.141. 단백질 연구를 위한 실험 기법 1.1. Bradford assay를 이용한 단백질 정량 Bradford assay를 이용한 단백질 정량은 단백질 연구에서 매우 중요한 실험 기법이다. Bradford assay는 단백질을 정량, 즉 시료 내에 포함된 원하는 단백질의 양 또는 농도를 결정하기 위해 진행하는 실험이다. Bradford assay의 원리는 Coomassie Brilliant Blue G-250 (CCB) 염료가 단백질의 방향족 아미노산 곁사슬과 결합하면서 흡광도가 변화하는 것을 이용한다. CCB 염료는 단백질과 ...2024.10.14
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제한효소 및 소화 실험: 효소작용 영향2024.09.191. 제한효소와 DNA 절단 1.1. 제한효소의 종류와 특성 제한효소는 DNA의 특정한 염기배열을 식별하고 이중사슬을 절단하는 핵산분해효소(endonuclease)의 하나로서, 유전공학에서 재조합 DNA를 만들기 위해 사용하는 특수한 효소이다. 제한효소는 주로 세 가지 유형으로 분류된다. 첫째, Ⅰ형 제한효소는 인식하는 염기서열과 절단 위치가 다른 곳에 있어 연구에 부적합하다. 둘째, Ⅱ형 제한효소는 특정 염기서열을 인식하여 이를 정확히 절단하는 특성을 가지고 있어 유전자 조작에 주로 사용된다. 이 제한효소는 인식하는 염기서열이...2024.09.19
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