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이화여대 생명과학실험 A+ 리포트(Realtime PCR을 이용한 유전자 발현 분석)2025.01.231. RNA sequencing RNA sequencing은 DNA로부터 전사되는 모든 RNA 전사체의 염기서열을 차세대 분석기술을 사용하여 분석하는 기술이다. RNA sequencing을 위해서는 cDNA가 필요한데 cDNA를 준비하는 일반적 과정은 보통 RNA 추출>RNA 선택>cDNA 합성>라이브러리 제작으로 이루어진다. RNA 염기서열 분석 기술을 통해 alternative RNA splicing, 유전자의 발현량, 염기서열의 변이, gene fusion, single nucleotide polymorphism, SNP 등의...2025.01.23
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이화여대 생명과학실험 A+ 리포트(DNA plasmid transfection, Immunoprecipitation)2025.01.231. DNA plasmid transfection DNA plasmid transfection 실험의 목적은 고분자-유전자 복합체를 이용하여 동물 세포에 plasmid DNA를 넣어 세포의 형질을 전환하는 것이다. 이를 위해 먼저 단백질 A에 대한 염기서열 옆에 epitope tag인 V5 폴리펩타이드에 대한 염기서열을 같이 붙여서 플라스미드 DNA를 세포 내에 넣어준다. 그러면 플라스미드가 핵내에 들어가서 DNA 역할을 할 수 있고, 이후 벡터 DNA가 mRNA로 전사되어 V5가 붙은 단백질 A가 발현된다. 2. Immunopre...2025.01.23
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플라스미드 DNA 정제2025.01.121. 플라스미드 DNA 분리 플라스미드 DNA는 재조합 DNA 조작을 위한 운반체 DNA로 사용되며, 대장균에 플라스미드를 삽입하는 과정을 Bacterial Transformation이라고 한다. 대장균 세포에는 플라스미드 DNA와 염색체 DNA가 독립적으로 존재하므로, 플라스미드 DNA를 따로 분리하는 과정을 Purification of plasmid DNA라고 한다. 알칼리 용해법(Alkali lysis)은 높은 pH의 알칼리성 용액을 사용하여 세포벽과 세포막을 용해시킨 후, 산성 용액을 처리하여 플라스미드 DNA만을 분리해내는...2025.01.12
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생명과학실험1 단백질 정제 및 기능 분석을 위한 DEAE sepharose anion exchange chromatography2025.01.171. 단백질 정제 이 실험에서는 E.coli에서 추출한 alkaline phosphatase(AP) 단백질을 DEAE sepharose anion exchange chromatography를 이용하여 정제하는 과정을 다루고 있습니다. AP는 E.coli의 outer membrane과 inner membrane 사이에 존재하는 periplasmic space에 위치하며, osmotic shock을 통해 추출할 수 있습니다. 추출된 AP 단백질 혼합물은 열처리, 투석, ion exchange chromatography 등의 과정을 거쳐...2025.01.17
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동식물 세포관찰2025.01.131. 마이크로미터 사용법 광학 현미경, 대물 마이크로미터, 접안 마이크로미터를 이용하여 세포의 크기를 측정하는 방법에 대해 설명하고 있습니다. 대물 마이크로미터 한 눈금이 10마이크로미터이며, 배율에 따라 접안 마이크로미터 한 눈금의 길이가 달라지는 것을 설명하고 있습니다. 2. 동물세포 구조 동물세포의 주요 세포 소기관인 세포핵, 미토콘드리아, 세포막, 리보솜, 내막계(소포체, 골지체, 핵막, 리소좀, 소포, 원형질막) 등의 구조와 기능에 대해 설명하고 있습니다. 3. 식물세포 구조 식물세포만 가지는 세포 소기관인 엽록체와 세포벽...2025.01.13
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아주대 생명과학실험 Plasmid DNA 추출2025.01.131. 플라스미드 DNA 플라스미드 DNA는 원핵세포의 세포질 및 진핵생물의 세포 소기관에서 발견되는 작고 원형의 이중 가닥 DNA 분자이다. 이 DNA 조각들은 자율적으로 복제할 수 있으며, 세포의 염색체 DNA와는 독립적으로 존재한다. 플라스미드는 보통 추가적인 유전 정보를 포함하고 있으며, 특정 환경 조건에서 숙주 세포에 유익할 수 있는 기능들을 부여한다. 2. 제한효소 제한효소(EcoRI)는 플라스미드 DNA를 실험실에서 조작하기 위한 주요 도구이다. 이 효소는 특정 짧은 DNA 서열을 인식하고 절단할 수 있는 능력이 있어, ...2025.01.13
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아주대 생명과학실험 개체군의 성장2025.01.131. r/K 선택 이론 r/K 선택 이론은 생태학에서 유기체가 진화 과정에서 자손의 양과 질 사이에서 어떻게 균형을 이루는지 설명하는 이론입니다. 이론을 통해 생물 종의 번식 전략과 환경 적응 방식을 이해할 수 있습니다. 이론은 유기체가 두 가지 전략, r-전략과 K-전략 중 하나를 선택하여 환경에 적응한다고 가정합니다. 2. 개체군 개체군(population)은 특정 환경 지역에 서식하는 동일 종(species)의 생물 개체들의 집단을 의미합니다. 이 개체군 내의 개체들은 서로 상호작용하며, 이러한 상호작용에는 경쟁, 공생 등이 ...2025.01.13
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Cell harvest and protein assay2025.01.231. Cell harvest 세포 배양 시 adherent cell과 suspension cell로 구분할 수 있으며, adherent cell을 harvest하는 방법에는 화학적 방법(trypsin, accutase 사용)과 물리적 방법(scraper 사용)이 있다. 이번 실험에서는 물리적 방법인 scraper를 사용하여 adherent cell을 harvest하였다. 2. Protein extraction 세포 내 단백질을 추출하기 위해 lysis buffer와 phosphatase/protease inhibitor를 사용하여 ...2025.01.23
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Ion Exchange Column Chromatography2025.01.211. Alkaline Phosphatase (AP) Alkaline Phosphatase (AP)는 인산기(phosphate group)을 떼어내는 기능을 하며, alkaline condition에서 활성을 띠는 특징을 가진다. AP는 E. coli의 outer membrane과 inner membrane 사이의 periplasmic space에 존재한다. 2. Protein Purification AP를 정제하기 위해 osmotic shock, centrifuge, dialysis, heat inactivation 등의 과정을 거...2025.01.21
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Protein Electro-transfer and Western blot2025.01.231. Western blotting Western blotting은 단백질에 대한 blotting 기술을 뜻하며, 항원-항체 반응을 이용한다. 단백질 혼합물을 polyacrylamide gel에서 SDS-PAGE를 이용하여 크기에 따라 분리하고 membrane으로 electro-transfer하여 흡착시킨 후 membrane 표면에서 항체를 이용하여 원하는 단백질의 존재를 확인하는 전반적인 과정을 의미한다. 2. SDS의 역할 및 원리 SDS-PAGE는 SDS가 단백질에 일정 간격으로 결합하여 charge density를 일정하게 ...2025.01.23
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