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형질 전환 실험: 원핵 세포의 유전자 조작2025.11.141. 형질 전환(Transformation) 형질 전환은 외부에서 만들어진 plasmid를 plasmid가 없는 원핵 세포에 삽입하여 새로운 유전형질을 나타내게 하는 과정입니다. 제한효소를 이용하여 plasmid의 특정 부위를 절단하고 원하는 염기서열을 삽입합니다. Competent cell을 CaCl₂로 처리하여 외부 DNA를 쉽게 받아들일 수 있는 상태로 만들고, 42°C heat-shock과 ice bucket 처리를 통해 plasmid를 세포 내로 도입합니다. 이 과정은 인슐린 생산 등 의약품 개발에 광범위하게 활용됩니다. ...2025.11.14
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단백질 정량 분석: BCA assay2025.01.021. 단백질 정량 분석 BCA assay는 단백질 정량 분석 방법 중 하나로, 단백질 시료에 BCA 시약을 가한 후 흡광도를 측정하여 단백질 농도를 구하는 방법이다. 이 방법은 단백질에 의해 환원된 구리 이온이 BCA와 반응하여 보라색 화합물을 형성하는 원리를 이용한다. 표준 단백질로 BSA를 사용하여 표준곡선을 그린 후, 미지의 단백질 시료의 흡광도를 대입하여 농도를 계산할 수 있다. BCA assay는 단백질의 아미노산 조성에 크게 영향을 받지 않아 비교적 정확한 정량이 가능하다는 장점이 있다. 1. 단백질 정량 분석 단백질 정...2025.01.02
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단백질 정량법 비교: BCA와 Bradford 분석2025.11.161. BCA Assay (Bicinchoninic Acid Assay) BCA assay는 562nm 파장에서 흡광도를 측정하여 단백질을 정량하는 방법입니다. 보랏빛 착물 생성량이 증가할수록 흡광도 값이 커지며, 흡광도와 단백질 양이 비례합니다. Working Reagent는 MA, MB, MC를 25:24:1의 부피비로 혼합하여 제조하며, 60°C에서 1시간 반응시킵니다. 본 실험에서 미지시료의 평균 농도는 1.196 μg/ml로 측정되었습니다. 2. Bradford Assay Bradford assay는 Coomassie bri...2025.11.16
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Horseradish Peroxidase 효소 동역학 분석 실험2025.11.161. 효소 동역학 분석 (Enzyme Kinetic Assay) Horseradish Peroxidase (HRP)를 이용한 효소 동역학 실험으로, ABTS를 기질로 사용하여 분광광도계로 흡광도 변화를 측정했다. 다양한 기질 농도(50-400 μM)에서 시간에 따른 흡광도 변화를 405nm에서 20초 간격으로 5분간 측정하여 초기 반응속도(V₀)를 구했다. Michaelis-Menten 반응식과 Lineweaver-Burk plot을 이용하여 Vmax, Km, Kcat 값을 계산했다. 2. Lineweaver-Burk Plot 분석...2025.11.16
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간조직 지질농도 측정 실험2025.11.161. 콜레스테롤 측정 500nm 파장에서 콜레스테롤의 흡광도를 측정하여 표준곡선을 작성했다. 1조와 2조의 표준곡선 공식은 각각 y = 1283.7x - 60.731 (R² = 0.9928)과 y = 954.46x - 36.968 (R² = 0.9919)이다. 원액과 10배 희석 용액의 콜레스테롤 농도를 표준곡선과 계산식으로 측정했으며, 원액의 경우 두 방법의 차이가 크지 않았으나 10배 희석 용액에서는 큰 차이가 나타났다. 이는 실험 과정에서의 오차로 인한 것으로 분석된다. 2. 중성지질 측정 중성지질 표준곡선은 1조 y = 14...2025.11.16
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단백질 정량분석 실험 예비레포트2025.11.171. 단백질 정량 분석법 단백질 정량 분석은 시료에 포함된 단백질의 양적 관계를 확인하기 위한 분석으로 많은 생화학 실험의 기본이 된다. 주요 분석법으로는 UV법, Lowry법, BCA법, Bradford법 등이 있다. UV법은 단백질을 구성하는 아미노산 중 방향족 고리를 지닌 티로신과 트립토판이 파장 280nm의 자외선을 잘 흡수한다는 점을 이용하며, Lambert-Beer's Law에 의해 흡광도와 단백질 농도는 비례 관계를 가진다. 2. 단백질의 구조와 기능 단백질은 약 20가지의 다른 아미노산들이 펩타이드 결합에 의해 길게 ...2025.11.17
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Lowry법을 이용한 단백질 정량 분석 실험2025.11.171. Lowry 단백질 정량법 Lowry법은 Sodium carbonate, Sodium Dodecyl Sulfate, Copper tartrate hydrate로 구성된 Lowry reagent와 Folin-Ciocalteu's Phenol reagent를 사용하는 단백질 정량 분석 방법이다. 방향족 아미노산의 Tyr, Trp와 반응하여 청색을 나타내며, 뷰렛반응 이후의 Cu+와 아미노산의 펩타이드 결합에 의해 환원되어 푸른색으로 변한다. 본 실험에서는 BSA 표준용액을 이용해 표준곡선을 도출하고 미지 농도의 단백질 시료 농도를 ...2025.11.17
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[생화학실험] (A+) Plasmid DNA isolation and characterization by electrophoresis2025.05.031. DNA DNA(Deoxyribo Nucleic Acid)는 뉴클레오타이드의 중합체인 두 개의 긴 가닥이 서로 꼬여있는 이중나선 구조로 되어있는 고분자화합물이다. DNA는 4종류의 뉴클레오타이드가 중합 과정을 통해 연결된 가닥으로 이루어져 있으며, 이 가닥은 Cytosine, Guanine, Adenine, Thymine은 독특한 핵염기(nucleobase)로 구분되기 때문에 흔히 DNA 염기서열이라고 부른다. DNA 염기서열은 유전정보를 나타내는 유전자 구간과 그렇지 않은 비부호화 DNA 구간으로 나눌 수 있다. 2. 재조합 ...2025.05.03
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[만점 레포트] 연세대학교 생화학실험(1) 12주차 다당류의 구조분석 및 요오드 반응2025.05.041. 다당류의 구조분석 이 실험에서는 요오드 산화(periodate oxidation) 반응을 이용하여 단당류와 이당류의 함량을 계산하고 다당류(글리코겐)의 1차 구조를 알아보았습니다. 요오드 산화 반응은 인접한 두 개의 하이드록시기 또는 하이드록시기와 알데히드/케톤기가 있는 경우 산화와 C-C 결합 분해를 일으킵니다. 실험 결과, 이론적인 값과 오차율을 보였고 글리코겐의 가지 개수도 측정되었습니다. 이를 통해 다당류의 구조적 특성을 확인할 수 있었습니다. 2. 요오드 산화 반응 요오드 산화 반응은 당 분자 내 인접한 두 개의 하이...2025.05.04
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생화학 실험 보고서 - 동물세포 배양 및 관찰2025.01.271. 동물세포 배양 이 실험은 MCF-7 세포를 사용하여 동물세포의 배양 과정을 이해하고 관찰하는 것을 목적으로 합니다. 동물세포는 핵, 세포질, 세포막 등의 세포 내 구조를 가지고 있으며, 세포 간 상호작용을 통해 조직과 기관을 형성합니다. 동물세포 배양을 위해서는 적절한 배지, 온도, pH 등의 조건이 필요하며, 계대배양을 통해 세포를 지속적으로 증식시킬 수 있습니다. 이번 실험에서는 부착성 세포인 MCF-7 세포를 사용하여 배양 과정을 거치고, 현미경으로 세포의 변화를 관찰하였습니다. 2. 세포 배양 기술 세포 배양은 인공적으...2025.01.27
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