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유전자와 유전자 활성 연구를 위한 분자도구2025.01.181. 서던블롯 서던블롯은 특정 DNA 절편을 동정하는 데 사용되는 기술입니다. 이 방법은 genomic DNA를 제한효소로 자른 후 아가로스 겔 전기영동을 통해 크기별로 분리합니다. 그리고 DNA를 변성시켜 nitrocellulose 또는 nylon 멤브레인으로 이동시킵니다. 이렇게 이동된 DNA는 방사선 동위원소나 비방사선 물질로 표지된 DNA 또는 RNA 탐침과 하이브리다이제이션되어 자기방사법 등을 통해 검출됩니다. 이 기술은 genomic DNA뿐만 아니라 plasmid, cosmid, bacteriophage 등의 분석에도 ...2025.01.18
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PCR을 통한 gene structure 분석2025.05.011. EtOH Precipitation DNA는 전하를 띄는 인산골격을 가지고 있어서 극성이다. 물도 극성이므로 물에 잘 녹는다. DNA를 뭉치게 하려면 물과 DNA간 결합을 약화시켜야 한다. Ethanol은 물보다 훨씬 덜 극성이다. 따라서 ethanol을 첨가하면 DNA의 인산기와 다른 양이온간의 결합이 강해지면서 DNA 침전을 형성한다. 이 과정을 위해선 적절한 양의 양이온이 필요하다. 너무 많으면 DNA와 같이 침전되고 너무 적으면 침전되지 못한 DNA가 생긴다. 이 실험에선 3M sodium acetate를 final 0....2025.05.01
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[일반생물학실험]DNA 추출2025.01.151. DNA 추출 이 실험에서는 플라스미드라는 유전체 이외의 자가복제 DNA를 분리하여 DNA 추출 및 정제 방법의 원리를 배우고, DNA의 이화학적 특성을 이해하는 것이 목적입니다. DNA의 발견, 구조, 분자 구조, 플라스미드, 유전자 검사와 문제점, 젤 전기 영동 등 DNA와 관련된 다양한 내용이 다루어졌습니다. 2. DNA 구조 DNA는 염기, 당, 인산이 결합된 뉴클레오티드로 구성되며, 이중 나선 구조를 가집니다. 염기는 퓨린과 피리미딘 계열로 나뉘며, 아데닌-티민, 구아닌-시토신이 수소결합으로 결합합니다. DNA는 이러한...2025.01.15
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DNA 제한효소2025.01.151. 제한효소 제한효소는 세균이 박테리오파지의 공격을 받으면 생산하는 효소로 이중 나선의 DNA의 특정한 염기서열을 인식해 그 부분의 절단에 있어 촉매작용을 하는 효소이다. 대부분의 제한효소는 인식자리(recognition site) 또는 제한 자리(restriction site)라는 특정한 염기서열이 있는 자리에서 DNA를 절단한다. 제한효소는 회문이라는 양 사슬의 5'부터 3' 방향으로 똑같은 서열을 가진 DNA의 부위를 인식해 작용한다. 제한효소가 DNA를 절단하면 이중 가닥 중 한 가닥이 돌출된 형태를 띠는데 이를 점착 말단...2025.01.15
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DNA 분리2025.01.161. DNA 구조 DNA는 인산, 당, 염기가 1:1:1의 비율로 결합한 뉴클레오타이드의 결합체이며, 2개의 폴리뉴클레오타이드가 이중 나선 구조를 이루고 있다. DNA 가닥은 인산이 가장 바깥쪽에 위치하고 있으며, 4가지 질소 염기(A, T, G, C)가 수소결합으로 쌍을 이루고 있다. 2. 중심원리 DNA를 주형으로 하여 RNA를 합성하는 전사 과정과, 전사된 mRNA가 단백질로 번역되는 과정으로 구성된다. 원핵세포의 경우 전사와 번역이 동시에 일어날 수 있다. 3. DNA 추출 원리 세포 및 조직을 파괴하고 단백질을 변성시킨 후...2025.01.16
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PCR 관련 퀴즈 및 정답(생화학) A+ 과제레포트2025.01.201. PCR의 3단계 procedures PCR 반응요소에는 Target DNA, Primers (oligonucleotides complementary to target), Nucleotides(dATP, dCTP, dGTP, dTTP), Thermostable DNA polymerase가 있다. PCR의 세 가지 반응 단계는 DNA 변성 (Denaturation), primer 의 Annealing, 신장 반응 (Extension)이다. DNA 변성 단계에서는 95℃의 열을 가해 DNA 이중 가닥을 분리시킨다. Annealing...2025.01.20
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[분자생물학실험]성장곡선 그리기2025.05.021. 세균 성장 곡선 실험을 통해 배지 속 세균의 성장을 흡광도 측정으로 그래프화하고 해석하였다. 세균의 성장 단계인 lag phase, exponential phase, stationary phase, death phase에 대해 설명하였다. 흡광도 측정 방법과 희석 계산식을 제시하였다. 2. 세균 doubling time 계산 실험 결과에서 측정한 흡광도 데이터를 바탕으로 세균의 비성장속도와 doubling time을 계산하였다. 계산 과정과 결과를 상세히 설명하였다. 3. 실험 고찰 및 개선 방안 실험 결과에서 나타난 오차 원...2025.05.02
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[유전공학] CRISPR/Cas9 system과 관련논문 분석2025.05.031. CRISPR/Cas9 System CRISPR/Cas9 System은 현재 가장 많이 사용되고 있는 3세대 Genome Editing 기술입니다. CRISPR은 박테리아에서 발견되는 짧은 회문서열을 의미하며, 이는 박테리아가 박테리오파지에 대해 가지고 있는 adaptive immunity에서 중요한 역할을 합니다. CRISPR 부위 사이에는 spacer라는 부위가 있는데, 이는 이전에 박테리아 내부에 침입한 경험이 있는 파지의 서열 일부를 저장해 둔 것을 의미합니다. pre-crRNA가 생성되고 tracrRNA가 결합하면 gu...2025.05.03
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DNA - EtBr 염색, Methylene blue 염색2025.05.111. DNA 구조 DNA는 이중나선 구조로 구성되어 있으며, 두 가닥의 DNA가 거의 공통된 축의 주위를 오른쪽으로 감고 있다. 이 구조는 DNA에 있는 화학 결합이 비틀림을 만들어내며, 그 결과 안정성을 가지게 해준다. 또한 이중나선 구조 안쪽에 있는 염기를 보호하기에 적절하다. 최근에는 다양한 유전자 치료법에서 잘못된 염기서열을 교정할 때 두 가닥의 상보성을 활용하기도 한다. 2. DNA 염색 방법 DNA 염색 방법에는 EtBr(Ethidium bromide)과 Methylene blue 염색 방법이 있다. EtBr은 DNA의 ...2025.05.11
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분자생물학 및 유전공학의 실험방법2025.05.101. Restriction endonuclease DNA의 specific short sequences를 인식하고 쪼갤 수 있는 enzyme입니다. Cloning vectors는 host cell에 외래 DNA를 삽입하기 위해 사용할 수 있는 DNA로, selectable markers와 replication origins을 가지고 있습니다. 2. Nucleases Nucleases(핵산가수분해효소)는 phospho diester bond의 ester bond를 Hydrolyze하는 enzyme이며, Phosphatases(인산분해...2025.05.10
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