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단백질 분석(SDS-PAGE & Fluorescence)2025.05.141. SDS-PAGE SDS-PAGE는 Sodium dodecyl sulfate - polyacrylamide gel eletrophoresis의 약자로, 5~250 kDa 사이의 단백질을 분리할 때 사용되는 방법입니다. SDS는 단백질에 결합하여 전하의 영향을 배제하고 크기에 의해 이동속도가 결정되도록 합니다. 또한 DTT와 같은 reducing agent는 단백질의 disulfide bond를 변성시켜 linear한 1차 구조로 만듭니다. SDS-PAGE 후 단백질을 확인하기 위해 Coomassie Briliant Blue, s...2025.05.14
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단백질의 분석(질량, 서열, ELISA) 요약정리2025.04.301. 단백질 질량 측정 단백질의 질량을 측정하기 위해서는 단백질을 기체 상태의 이온으로 바꾼 후 전기장 하에서 질량 대 전하비(m/z)를 구하는 방식을 사용한다. MALDI와 ESI 기법을 통해 단백질을 이온화할 수 있으며, 이후 TOF 분석기를 이용하여 질량을 측정할 수 있다. 2. 항체를 이용한 단백질 검출 및 정량 항체는 특정 단백질에 결합하여 면역 반응을 일으키므로, 이를 이용하여 단백질을 검출하고 정량할 수 있다. ELISA 기법은 항체와 연결된 효소를 이용하여 단백질의 존재 유무와 양을 측정할 수 있다. Western b...2025.04.30
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Western blot 실험 방법2025.05.101. Western blotting Western blotting (immunoblotting)은 샘플 내 특정 단백질의 존재 여부, 양, 크기를 측정하는 실험이다. 단백질이 소량이어도 검출 가능하고, 다양한 종류의 단백질이 혼합된 시료를 검사할 때도 항체의 기질 특이성 덕분에 원하는 단백질만 검출할 수 있다는 장점이 있다. 2. Western blot 실험 순서 Western blot 실험은 크게 5개의 순서로 이루어진다. 1) SDS-PAGE를 시행하여 단백질을 크기별로 분리, 2) 분리된 단백질을 membrane에 전이, 3)...2025.05.10
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SDS-PAGE and Protein Analysis2025.01.211. SDS의 역할 및 SDS-PAGE 원리 SDS(Sodium Dodecyl Sulfate)는 계면활성제로서 친수성과 소수성 부분을 모두 지니고 있으며, 단백질을 변성할 수 있는 물질이다. SDS-PAGE는 이러한 SDS의 특성을 토대로 하여 단백질을 분자량에 따라 band 형태로 분리하는 실험이다. 단백질은 그 구조와 전하, 분자량이 모두 다르기 때문에 SDS를 통해 단백질의 구조와 전하를 모두 일정하게 한 뒤 분자량에 의해서만 분석을 진행한다. 2. Gel에 들어가는 시료의 역할 Acrylamide와 N,N'-Methylene...2025.01.21
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이화여대 생명과학실험 A+ 리포트(Western Blot)2025.01.231. Western Blot 원리 Western Blot은 항원-항체 반응을 이용하여 여러 단백질의 혼합물로부터 특정 단백질을 찾아내는 방법이다. 이 실험에서는 단백질의 SDS-PAGE 분리, 단백질의 membrane으로의 transfer, 항원-항체 반응 및 항체에 부착된 효소의 반응에 의한 발색 반응 등의 실험 원리 및 기법을 습득한다. 2. SDS-PAGE와 Stacking/Resolving Gel의 차이 Stacking gel은 단백질 시료를 gel에 loading 했을 때 모든 시료가 동일한 시작점에서 출발할 수 있도록 하...2025.01.23
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SDS-PAGE를 이용한 AP 단백질 분석 및 Coomassie Blue Staining2025.01.171. SDS-PAGE를 이용한 단백질 분석 SDS-PAGE 실험을 통해 AP 단백질의 크기와 순도를 확인할 수 있었습니다. SDS-PAGE 과정에서 단백질의 3차 구조를 제거하고 크기에 따라 분리되도록 하여, 목표 단백질인 AP 단백질을 선별적으로 확인할 수 있었습니다. 또한 Coomassie Blue 염색을 통해 단백질 밴드를 시각화하여 분석할 수 있었습니다. 2. 단백질 정제 과정 단백질 정제 과정에서 target 단백질 이외의 비특이적으로 결합한 단백질들이 씻겨나가면서 target 단백질의 순도가 높아지는 것을 확인할 수 있었...2025.01.17
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A+ 생화학실험 <14주차. 단백질 분석 (SDS-PAGE)> 레포트2025.01.201. SDS-PAGE SDS-PAGE는 Sodium Dodecyl Sulfate (SDS)를 이용해 단백질에 음전하를 부여함으로써 Polyacrylamide Gel Electrophoresis (PAGE)를 수행하여 단백질을 크기에 따라 분리하는 전기영동 방법입니다. SDS-PAGE는 일반적으로 5~250 kDa 범위의 단백질을 분리하는 데 사용되며, 이 방법을 통해 단백질의 구조와 전하가 이동 속도에 미치는 영향을 제거할 수 있습니다. SDS에 의해 음전하를 띤 선형화 된 단백질은 전기장을 가했을 때 양극(+)을 향해 이동하며, ...2025.01.20
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SDS-PAGE를 이용한 단백질의 분석2025.01.231. SDS-PAGE SDS-PAGE는 SDS가 단백질에 일정 간격으로 결합하여 charge density를 일정하게 하고, 단백질을 변형시켜 모든 단백질이 일정 모양(선형)을 갖게 함으로써 단백질이 전기장에서 크기(분자량)에만 의존적으로 분리되게 한다. Stacking gel과 Resolving gel의 pH 차이로 인해 단백질이 크기별로 분리된다. Coomassie blue 염색을 통해 단백질 band를 확인할 수 있다. 2. 단백질 정제 실험 결과, sample2에서 Naa30 protein의 사이즈에 해당하는 protein ...2025.01.23
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대장균에서 재조합 단백질 생산 및 정제2025.01.131. 재조합 단백질 생산 대장균 BL21(DE3) 균주는 재조합 단백질 고발현에 널리 사용되며, lac 프로모터와 T7 프로모터를 이용하여 IPTG 유도 하에 단백질을 발현할 수 있다. 본 실험에서는 pET28a 벡터를 사용하여 His-tag 융합 단백질을 생산하고, Ni-NTA 친화성 크로마토그래피와 FPLC를 통해 단백질을 정제하는 방법을 익혔다. 2. 단백질 분석 SDS-PAGE를 통해 단백질 크기별 분리와 정제 과정을 확인하였고, Bradford assay로 단백질 농도를 정량하였다. 또한 DES와 OASS 효소 활성 측정을...2025.01.13
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식품생화학 아미노산, 펩타이드, 단백질 요약2025.05.071. 아미노산과 펩타이드 아미노산은 단백질을 이루는 기본단위 물질로서, 20개 다른 종류의 아미노산이 결합하여 펩타이드를 이루고 단백질을 형성합니다. 아미노산은 극성 아미노산(중성, 산성, 염기성)과 비극성 아미노산으로 구분되며, 중성 pH 상태에서 양극성 이온 형태로 존재합니다. 펩타이드는 아미노산이 펩타이드 결합으로 연결된 구조이며, 일부 펩타이드는 고유의 생리활성을 가지고 있습니다. 대표적인 합성 펩타이드인 아스파탐은 감미료로 사용되고 있습니다. 2. 단백질 구조 단백질은 아미노산이 중합된 고분자 물질로, 1차 구조(아미노산 ...2025.05.07
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