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일반생물학 실험 플라스미드 DNA 추출2024.11.241. 플라스미드 DNA 추출 1.1. 실험 목적 '플라스미드 DNA 추출' 실험의 목적은 Alkaline lysis (denaturation) method에 대해 알아보고, 이 방법을 통해 플라스미드 DNA를 추출해보는 것이다. 즉, 이 실험을 통해 플라스미드 DNA를 추출하는 대표적인 방법인 Alkaline lysis 방법의 원리와 특성을 이해하고, 실제로 이 방법을 적용하여 대장균으로부터 플라스미드 DNA를 분리해내는 것을 목적으로 한다. 1.2. 실험 이론 및 원리 1.2.1. DNA Mini prep DNA Mini p...2024.11.24
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플라스미드 추출2024.11.101. 플라스미드 DNA 추출 1.1. 플라스미드의 정의와 특성 플라스미드는 세포 내에서 세대를 통해 안정적으로 유지되고 전달되지만 염색체와는 독립적으로 존재하고 자율적으로 번식하는 유전자를 총칭하는 말이다. 진핵세포의 미토콘드리아나 엽록체 속에 들어 있는 DNA는 일반적으로 오르가넬 DNA라고 불리며 구별된다. 플라스미드는 세균의 생존에 필수적이지는 않지만 유전자의 존재로 인해 결합 전이(F 인자), 항생제에 대한 저항성(R 인자), 항균성의 합성(콜리신 인자)으로서의 기능을 한다. 또한 토양 박테리아에 존재하는 Ti 플라스미드와...2024.11.10
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polymerase chain reaction2024.10.171. 개요 1.1. PCR(Polymerase Chain Reaction)의 정의 PCR(Polymerase Chain Reaction)은 단시간에 DNA의 원하는 부분을 수백만개 이상으로 증폭시키는 기술이다. 주형 DNA 분자 한 개로부터 시작하여 반복적인 DNA 합성 과정을 통해 수백만개의 동일한 DNA를 생산할 수 있게 해준다. PCR은 단순하지만 강력한 기술로, 생물학의 거의 모든 분야에서 널리 사용되고 있다. 1.2. PCR의 중요성과 활용분야 PCR은 생물학의 거의 모든 분야에서 빼놓을 수 없는 매우 중요한 실험기법이다...2024.10.17
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형질전환 실험2024.11.171. 형질전환 1.1. 실험 이론 및 원리 1.1.1. 실험개요 형질전환이란 외부에서 만들어진 플라스미드를 플라스미드가 없는 원핵 세포 cell에 넣어 그 원핵 세포가 본래 성질과는 다른 새로운 유전형질을 나타내게 하여 삽입한 플라스미드를 대량으로 키우는 과정이다. 이 실험개요에 따르면 형질전환은 폐렴구균을 통해 DNA가 유전물질임을 PCR과 클로닝 등의 방법으로 증명했다. 예를 들어 인슐린의 경우 처음에는 돼지에게서 추출했지만 많은 수요에 비해 공급이 원활하지 못했고 깨끗하지 않을 수도 있다는 의견 때문에 중지되었다. 그 ...2024.11.17
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특정 유전자를 선택하여 T-Vector에 삽입시키고 이를 E-Coli 내에 transformation 시켜 형질전환 박테리아를 선택적으로 배양2024.11.171. 형질전환(Transformation) 1.1. 개념 및 원리 1.1.1. 형질전환의 정의 형질전환(transformation)이란 세포가 외부 DNA를 받아들여 자신이 갖고 있던 DNA와 결합함으로써 세포의 유전형질에 변화가 나타나는 현상을 말한다. 이러한 형질전환은 세균에서 흔히 관찰되며, 인공적인 유전자 조작을 통해 이루어질 수도 있다. 어떤 세포가 외부의 DNA를 받아들일 수 있는 생리적 상태에 있는 것을 '유능(Competent)'하다고 하며 그러한 상태를 '유능성(Competence)'이라고 한다. 원래 자연스...2024.11.17
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대장균 형질전환 실험보고서2024.08.241. 서론 1.1. 대장균의 특성과 중요성 대장균(Escherichia coli)은 그람음성의 간균이며, 포자 생성을 하지 않고 섭씨 37도에서 쉽게 자랄 수 있다. 대장균은 Theodor Esherich의 이름을 따서 발견되어 명명되었으며, 크기는 1-2 microns x 30-30 micron (1 micron = 0.001 mm)이다. 정상적인 인간의 장에는 감염되지 않는 대장균이 1kg 가량 들어 있는데, 이는 장내 세균총의 일부로 건강에 유익하다. 하지만 대장균 박테리아는 배설물과 함께 나와 식중독과 같은 질병을 일으킬 ...2024.08.24
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Lb배지 만들기2025.03.171. LB 배지 만들기 1.1. LB 배지의 정의와 특징 LB 배지는 미생물, 특히 대장균(E.coli)의 배양에 널리 사용되는 배지이다. LB 배지라는 명칭은 생화학자 Luria와 Bertani의 이름에서 유래되었으며, 용원성(Lysogeny)을 연구하기 위해 고안된 배지로 알려져 있다. LB 배지는 미생물이 생장하는 데 필요한 다양한 영양 성분을 함유하고 있어, 미생물의 대량 배양, 생화학적 연구, 대사산물 생산 등 다양한 목적으로 사용된다. LB 배지는 액체와 고체 형태로 모두 제조될 수 있으며, 고체 배지의 경우 한천(ag...2025.03.17
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PCR,전기영동,T-vector ligation2024.10.221. Gel extraction & TA cloning 1.1. 실험 개요 Agarose gel 전기영동을 통해 확인한 PCR product를 gel 상에서 분리 및 정제하는 Gel extraction을 수행하고, 분리된 PCR product의 3' 말단에 Taq polymerase로 인해 A overhang이 존재한다는 특성을 이용하여 T vector에 DNA ligase로 연결시키는 TA cloning을 진행하는 것이 이번 실험의 개요이다." 1.2. Gel extraction 1.2.1. 원리 gel 추출의 원리는 다음과 ...2024.10.22
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LB broth2024.11.011. 미생물 배지 제조 및 멸균 1.1. 미생물 배지의 이해 1.1.1. 미생물 배양에 필요한 영양 성분 미생물 배양에 필요한 영양 성분은 다음과 같다. 미생물이 생장하기 위해서는 탄소원, 질소원, 무기염류, 비타민 등 다양한 영양 성분이 필요하다. 탄소원은 보통 포도당, 자당, 면역효소 등이 사용되며, 질소원으로는 암모니아, 질산염, 요소, 아미노산 등이 이용된다. 무기염류에는 칼슘, 마그네슘, 철, 인, 황, 염소, 칼륨 등이 포함되며, 이들은 효소, 세포막, 세포벽 구성에 필요하다. 또한 비타민 B1, B2, B6, 니...2024.11.01
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TA cloning2024.10.091. 실험 소개 1.1. Gel Extraction Gel extraction 실험은 아가로스 전기영동을 통해 확인한 PCR product를 gel 상에서 분리 및 정제하는 것이 목적이다. DNA 분자는 아가로즈 겔 내에서 전기영동되어 분리된 후, 특정 DNA 밴드를 겔에서 잘라내어 추출하는 과정을 거치게 된다. 우선 젤 슬라이스에 FADF 버퍼를 넣고 vortexing하여 젤이 완전히 용해되도록 한다. 이때 0.8% 아가로스 겔을 사용했기 때문에 FADF 버퍼를 500㎕ 첨가했다. 이후 55℃에서 10분간 incubation...2024.10.09
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