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생명과학실험1 SDS-PAGE & Coomassie blue Staining2025.01.131. SDS의 역할 및 원리 SDS(sodium dodecyl sulfate)는 계면활성제의 일종으로 단백질이나 핵산의 구조를 깨뜨려 선형으로 만들어주는 역할을 한다. 아미노산의 소수성 부분과 hydrophobic interaction을 하며 결합하는데, 아미노산 2개당 1개 정도 binding하여 단백질을 변성한다. 2. Gel에 들어가는 시료의 역할 ① Tris-HCl: Stacking gel과 Resolving gel의 pH를 다르게 하여 각 gel에서 Glycine의 charge 다르게 조정해준다. 또한 Cl-를 첨가해주어서...2025.01.13
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A+ 생화학실험 <14주차. 단백질 분석 (SDS-PAGE)> 레포트2025.01.201. SDS-PAGE SDS-PAGE는 Sodium Dodecyl Sulfate (SDS)를 이용해 단백질에 음전하를 부여함으로써 Polyacrylamide Gel Electrophoresis (PAGE)를 수행하여 단백질을 크기에 따라 분리하는 전기영동 방법입니다. SDS-PAGE는 일반적으로 5~250 kDa 범위의 단백질을 분리하는 데 사용되며, 이 방법을 통해 단백질의 구조와 전하가 이동 속도에 미치는 영향을 제거할 수 있습니다. SDS에 의해 음전하를 띤 선형화 된 단백질은 전기장을 가했을 때 양극(+)을 향해 이동하며, ...2025.01.20
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[만점 레포트] 연세대학교 생화학실험(1) 4주차 gel filteration chromatography2025.05.041. Gel Filtration Chromatography Gel filtration chromatography is a technique used to separate molecules based on their size and shape. It involves passing a sample through a column packed with porous beads, where larger molecules elute first and smaller molecules elute later. The technique is usefu...2025.05.04
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SDS-PAGE2025.01.121. SDS-PAGE SDS-PAGE는 단백질을 분리하는 기술로, 전기영동 이동성을 이용한다. 단백질은 SDS 처리를 통해 균일하게 음전하를 띠게 되어 분자량에 따라 분리될 수 있다. 이 실험에서는 단백질 발현에 IPTG의 영향을 확인하고자 하였으나 이전 실험 결과의 불확실성으로 인해 IPTG의 영향을 명확히 알기 어려웠다. 단백질 염색 결과를 통해 약 45 kDa 크기의 단백질이 분리된 것을 확인할 수 있었다. 2. Discontinuous Buffer System Discontinuous buffer system은 stackin...2025.01.12
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단백질 정제2025.01.231. 재조합 단백질 발현 재조합 단백질 기법은 정제하려고 하는 단백질의 유전자를 플라스미드 벡터에 삽입한 후, 이 플라스미드 벡터를 다시 세포에 도입하면 그 세포가 도입된 외부 유전자를 마치 원래 자기가 가지고 있던 유전자인 것처럼 발현을 하는 방법이다. 이번 단백질 정제실험에서 사용하는 플라스미드인 pET28a Vector는 kanamycin이라는 항생제에 대한 저항성을 부여하는 유전자인 KanR을 갖고 있어, 배양액에 kanamycin 항생제를 넣어놓고 그곳에 대장균을 넣으면 KanR을 갖고 있는 플라스미드인 pET28a Vec...2025.01.23
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SDS-PAGE를 이용한 AP 단백질 분석 및 Coomassie Blue Staining2025.01.171. SDS-PAGE를 이용한 단백질 분석 SDS-PAGE 실험을 통해 AP 단백질의 크기와 순도를 확인할 수 있었습니다. SDS-PAGE 과정에서 단백질의 3차 구조를 제거하고 크기에 따라 분리되도록 하여, 목표 단백질인 AP 단백질을 선별적으로 확인할 수 있었습니다. 또한 Coomassie Blue 염색을 통해 단백질 밴드를 시각화하여 분석할 수 있었습니다. 2. 단백질 정제 과정 단백질 정제 과정에서 target 단백질 이외의 비특이적으로 결합한 단백질들이 씻겨나가면서 target 단백질의 순도가 높아지는 것을 확인할 수 있었...2025.01.17
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크로마토그래피에 의한 단백질 정제 탐구2025.01.291. 단백질 정제 단백질 정제는 정제된 단백질을 분리하고 얻는 과정이다. 유전자 재조합 이후, 단백질 발현 과정을 거쳐 단백질 정제 단계에서 단백질을 정제할 수 있는 다양한 크로마토그래피 기법이 있다. 이러한 기술을 통해 특정 단백질을 정밀하게 분리할 수 있으며 바이오 의약품, 생명공학 및 기초 연구 분야에 적용하여 활용될 수 있다. 2. 크로마토그래피 기법 크로마토그래피는 단백질 정제에 사용되는 다목적 기술로, 전하 기반 분리를 위한 이온 교환, 특정 결합 상호작용을 활용한 친화성, 크기 기반 분리를 위한 크기 배제가 포함된다. ...2025.01.29
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이화여대 생명과학실험 A+ 리포트(DEAE sepharose anion exchange chromatography)2025.01.231. Column chromatography 크로마토그래피는 주어진 시료 중 정량 분석하고자 하는 성분을 분리하고 확인하는 수단으로, 여러 다른 화합물들이 상이한 두 가지 phases 간에 분포되어 있거나 어느 물질 내의 분리 가능한 부위들 사이에 분포되어 있을 때 그 분포된 정도가 화합물들끼리 서로 다르다는 사실에 기초한 방법이다. 한 가지 상은 정지상(stationary phase)이고 다른 상은 이동상(mobile phase)이다. 이동상은 정지상을 일고 있는 물질 위로 흐르는데, 분리될 시료는 이 이동상을 따라 운반된다. 시...2025.01.23
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산성 탈인산가수분해효소의 활동도측정 및 정량2025.01.231. 산성 탈인산가수분해효소 산성 탈인산가수분해효소는 주로 리소좀에서 작용하며, 다양한 생리적 과정에서 중요한 역할을 한다. 이 효소는 특정 기질(예: p-니트로페닐 인산염, PNPP)로부터 인산기를 떼어내는 가수분해 반응을 촉매한다. 이 실험의 기질인 PNPP는 가수분해되면 노란색 화합물인 p-니트로페놀을 생성하며, 이 변화를 통해 효소의 활성을 측정할 수 있다. 산성 탈인산가수분해효소는 pH 5.0 이하의 산성 조건에서 가장 잘 작용한다. 2. 효소 활성 측정 및 정량 분석 PNPP를 이용한 효소 활성 측정: 산성 탈인산가수분해...2025.01.23
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생화학 5단원 단백질의 정제 요약정리2025.04.301. 단백질 정제의 중요성 세포 내에서 일어나는 많은 활동들은 단백질에 의해 수행된다. 따라서 단백질이 생체 내에서 어떤 기능을 하는지 아는 것은 생명활동을 이해하는데 매우 중요하다. 단백질의 아미노산 서열은 단백질의 3차 구조를 결정하고, 이 구조가 상호작용하여 4차 구조를 만든다. 즉 폴리펩타이드의 서열이 전체 구조를 결정하고, 단백질의 고유한 구조는 단백질의 기능을 결정한다. 따라서 이들 간의 관계는 매우 중요하다. 단백질의 구조를 알고, 서열을 구하고 그 기능을 알기 위해서는 반드시 순수한 단백질이 필요하다. 따라서 단백질의...2025.04.30
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