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SDS-PAGE를 이용한 단백질의 분석2025.01.231. SDS-PAGE SDS-PAGE는 SDS가 단백질에 일정 간격으로 결합하여 charge density를 일정하게 하고, 단백질을 변형시켜 모든 단백질이 일정 모양(선형)을 갖게 함으로써 단백질이 전기장에서 크기(분자량)에만 의존적으로 분리되게 한다. Stacking gel과 Resolving gel의 pH 차이로 인해 단백질이 크기별로 분리된다. Coomassie blue 염색을 통해 단백질 band를 확인할 수 있다. 2. 단백질 정제 실험 결과, sample2에서 Naa30 protein의 사이즈에 해당하는 protein ...2025.01.23
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Cell harvest and protein assay2025.01.231. Cell harvest 세포 배양 시 adherent cell과 suspension cell로 구분할 수 있으며, adherent cell을 harvest하는 방법에는 화학적 방법(trypsin, accutase 사용)과 물리적 방법(scraper 사용)이 있다. 이번 실험에서는 물리적 방법인 scraper를 사용하여 adherent cell을 harvest하였다. 2. Protein extraction 세포 내 단백질을 추출하기 위해 lysis buffer와 phosphatase/protease inhibitor를 사용하여 ...2025.01.23
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단백질의 분리2025.01.231. 단백질 분리 실험을 통해 원심분리를 이용하여 세포 내 단백질을 분리하는 방법을 익혔다. 단백질 분리를 위해 세포를 깨고 RIPA 버퍼에 녹인 후 원심분리하여 상층액을 얻었다. 이 상층액에는 세포에서 추출된 단백질이 포함되어 있다. 2. SDS-PAGE SDS-PAGE는 단백질의 크기에 따라 분리하는 기법으로, 단백질이 SDS에 의해 변성되어 전하/분자량 비율이 동일해지면 전기장 내에서 크기에 따라 이동속도가 달라져 분리된다. 이를 통해 단백질의 분자량을 확인할 수 있다. 3. 세포 용해 세포를 깨는 방법에는 homogeniza...2025.01.23
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생화학 실험/실습 보고서 (전기영동을 이용한 단백질의 관찰)2025.01.231. SDS-PAGE SDS-PAGE는 도데실황화 나트륨 폴리아크릴아마이드 겔 전기영동으로, 단백질이 전기장에 가해진 gel에서 크기에 따라 이동속도가 다름을 이용해 이들을 분리 및 분석하는 기법이다. SDS는 단백질의 3차원 구조를 풀어주고 단백질이 같은 전하/분자량을 가지도록 만들어준다. 단백질이 running gel에서 크기에 따라 이동성을 다르게 나타내는 원리를 이용하여 단백질을 분리한다. 2. 등전점 전기영동 등전점 전기영동은 단백질을 pH 기울기가 존재하는 gel에 놓고 전기장을 가해 주면, 단백질이 환경에 따른 전하를 ...2025.01.23
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이화여대 생명과학실험 A+ 리포트(Western Blot)2025.01.231. Western Blot 원리 Western Blot은 항원-항체 반응을 이용하여 여러 단백질의 혼합물로부터 특정 단백질을 찾아내는 방법이다. 이 실험에서는 단백질의 SDS-PAGE 분리, 단백질의 membrane으로의 transfer, 항원-항체 반응 및 항체에 부착된 효소의 반응에 의한 발색 반응 등의 실험 원리 및 기법을 습득한다. 2. SDS-PAGE와 Stacking/Resolving Gel의 차이 Stacking gel은 단백질 시료를 gel에 loading 했을 때 모든 시료가 동일한 시작점에서 출발할 수 있도록 하...2025.01.23
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이화여대 생명과학실험 A+ 리포트(SDS-PAGE, Coomassie Blue Staining)2025.01.231. SDS의 역할 및 원리 SDS는 계면활성제의 일종으로 단백질이나 핵산의 구조를 깨뜨려 선형으로 만들어주는 역할을 한다. 아미노산 두 개에 SDS 한 개가 결합하고 SDS분자의 긴 소수성 꼬리가 단백질의 골격을 감싸면서 음전하를 띈 꼬리의 끝부분이 밖으로 향하게 되므로 단백질은 자신이 본래 가지고 있던 전하와 관계없이 -전하를 띄게 된다. 2. PAGE의 원리 PAGE란 acrylamide의 중합반응으로 만들어진 gel을 이용한 전기 영동법을 말한다. acrylamide를 가교제로 중합한 polyacrylamide gel은 가교...2025.01.23
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[충남대] 분자생물, 생화학 실험 보고서12025.01.281. 대장균 배양 실험에서는 대장균(Escherichia coli, E. coli.)을 이용하여 실험을 진행하였다. 대장균은 정온동물의 창자에서 많이 볼 수 있는 박테리아로 단백질 발현에 대해 가장 일반적인 숙주이다. 대장균은 실험실에서 보관과 배양이 용이하다는 장점이 있어 주로 사용하는 원핵생물 모델이며, 자가복제를 하는 DNA 고리인 Plasmid DNA를 가지고 있다. 이는 DNA vector(운반체)로써 유전자 재조합 기술의 중요한 재료이다. 2. 배지 제조 실험에서는 TB(Terrific broth) 배지를 사용하였다. T...2025.01.28
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생화학 실험 보고서 - 전기영동을 통한 단백질 관찰 (SDS-PAGE)2025.01.271. 단백질 분리 및 분석 이번 실험에서는 SDS-PAGE를 사용하여 단백질을 분리하고 관찰하였습니다. SDS-PAGE는 단백질의 크기에 따라 분리되는 원리를 이용하는 전기영동 방법입니다. 실험 결과 MCF-7 세포에서 추출한 단백질 샘플에서 약 45kDa와 60kDa 크기의 단백질이 관찰되었습니다. 이를 통해 MCF-7 세포에 다양한 크기의 단백질이 존재함을 확인할 수 있었습니다. 2. 전기영동 기술 전기영동은 단백질, 핵산 등 생체 고분자를 분리하고 분석하는 데 널리 사용되는 기술입니다. 이번 실험에서는 SDS-PAGE 기법을 ...2025.01.27
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생명과학실험1 Western Blot2025.01.171. Western Blot Western Blot은 gel 전기영동을 통해 단백질을 분리하고, 특정 단백질의 존재 여부를 확인하는 실험이다. 이 실험에서는 SDS-PAGE를 이용하여 단백질을 크기별로 분류하고, 분류된 단백질을 membrane으로 옮긴 후에 항원-항체 상보적 결합을 이용하여 단백질의 존재 여부를 시각화하여 결과를 확인한다. 2. SDS-PAGE SDS-PAGE는 SDS라는 detergent를 사용하여 단백질의 구조를 선형으로 만듦으로써 단백질의 전하 밀도를 일정하게 만들고, 결국 단백질들이 크기로만 분류될 수 있게...2025.01.17
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[일반생물학실험] 전기 영동2025.01.021. 전기 영동 전기 영동은 단백질, 아미노산, 뉴클레오티드 등의 하전된 물질을 분리하거나 분석하는 데 효과적인 방법입니다. 단백질 분자는 표면에 양전하 또는 음전하를 띠고 있어, 전극을 설치하고 전압을 가하면 양극 또는 음극으로 이동하게 됩니다. 이동 속도는 입자의 전하량, 크기, 모양, 용액의 pH와 점성도, 다른 전해질의 농도 등 여러 요인에 따라 달라집니다. 전기영동법에는 이동계면 전기영동법, 띠 전기영동법, 불연속 gel 전기영동법, SDS-PAGE, agarose gel 전기영동법 등이 있습니다. 2. DNA 전기영동 D...2025.01.02
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