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[생화학실험]단백질 분리정제 및 기능분석 - buffer 만들기2025.05.051. 단백질 분리정제 및 기능분석 이 실험에서는 단백질 분리정제 및 기능분석을 위한 준비 과정으로 buffer를 제조하는 방법을 다룹니다. Buffer는 pH 변화에 영향을 받지 않는 용액으로, 생체반응에서 생성되는 산과 염기를 흡수할 수 있습니다. 실험에서는 1M Tris-HCl (pH 7.4), NaCl, MgSO4 stock solution을 제조하고, 이를 이용해 다양한 NaCl 농도의 elution buffer를 만드는 과정을 설명합니다. 또한 pH 미터기 사용법과 주의사항, 그리고 alkaline phosphatase 정...2025.05.05
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TRIS 완충용액 제작 방법 및 특징2025.01.141. 완충용액 완충용액은 화학적으로 안정적인 pH 값을 유지하는 용액으로, 화학 실험, 생물학 연구, 의학 등 다양한 분야에서 중요한 역할을 한다. 완충용액은 주로 약한 산과 그 상응염기 조합으로 만들어지며, pH를 상대적으로 안정적으로 유지할 수 있게 한다. 2. Tris 완충용액 Tris 완충용액은 트리스(트리스아민)와 트리스염(트리스하이드록시메틸아미노메탄)을 혼합하여 만든 완충용액으로, pH 7.0에서 9.0까지의 범위에서 안정성을 유지할 수 있다. 트리스의 약한 산성 특성과 염기 특성을 활용하여 산과 염기의 중화 반응을 통해...2025.01.14
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Folch 법을 이용한 조직 내 지방 추출 실험2025.11.131. Folch 법 Folch 법은 조직 내 지방을 추출하기 위한 고전적인 생화학 실험 방법입니다. 이 방법은 클로로포름과 메탄올의 혼합 용매를 사용하여 생물 조직에서 총 지질을 효율적으로 추출합니다. 극성 용매와 비극성 용매의 조합으로 다양한 종류의 지방 성분을 선택적으로 분리할 수 있으며, 영양학 및 생화학 연구에서 널리 사용되는 표준 프로토콜입니다. 2. 지방 추출 및 정량 조직 내 지방 추출은 생물학적 샘플에서 지질 성분을 분리하고 정량하는 과정입니다. 추출된 지방은 무게 측정을 통해 정량화되며, 이는 조직의 지방 함량을 파...2025.11.13
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아미노산 및 단백질의 정성분석 실험2025.11.121. 아미노산의 구조와 분류 아미노산은 아미노기(-NH2)와 카르복실기(-COOH)를 가진 유기화합물로, 단백질을 구성하는 기본 단위입니다. 표준 아미노산 20종은 글리신, 알라닌, 발린 등이 있으며, 기능에 따라 필수아미노산과 비필수아미노산으로 구분됩니다. 구조적으로는 지방족, 방향족, 함황 아미노산 등으로 분류되며, 각 아미노산은 고유한 화학적 성질과 생리적 역할을 가집니다. 2. 단백질의 정색반응 원리 단백질 정성분석에는 여러 발색반응이 사용됩니다. 닌히드린 반응은 아미노기와 반응하여 청자색을 생성하고, 크산토프로테인 반응은 ...2025.11.12
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제한효소 지도 작성 및 DNA 분석2025.11.121. 제한효소(Restriction Enzyme) 제한효소는 특정 DNA 염기서열을 인식하여 그 부위에서 DNA를 절단하는 단백질입니다. 각 제한효소는 고유한 인식 부위를 가지고 있으며, 이를 이용하여 DNA를 특정 위치에서 절단할 수 있습니다. 제한효소 지도 작성에서는 여러 제한효소를 사용하여 DNA를 절단하고, 생성된 단편의 크기를 분석하여 DNA 상의 제한효소 인식 부위의 위치를 결정합니다. 2. 제한효소 지도 작성(Restriction Mapping) 제한효소 지도 작성은 DNA 분자 상에서 제한효소의 인식 부위 위치를 파악...2025.11.12
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Horseradish Peroxidase 효소 동역학 분석 실험2025.11.161. 효소 동역학 분석 (Enzyme Kinetic Assay) Horseradish Peroxidase (HRP)를 이용한 효소 동역학 실험으로, ABTS를 기질로 사용하여 분광광도계로 흡광도 변화를 측정했다. 다양한 기질 농도(50-400 μM)에서 시간에 따른 흡광도 변화를 405nm에서 20초 간격으로 5분간 측정하여 초기 반응속도(V₀)를 구했다. Michaelis-Menten 반응식과 Lineweaver-Burk plot을 이용하여 Vmax, Km, Kcat 값을 계산했다. 2. Lineweaver-Burk Plot 분석...2025.11.16
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Bradford법을 이용한 단백질의 정량 분석2025.01.151. 단백질 정량 분석 실험 목적은 Bradford법을 이용하여 단백질 정량을 하고 Standard curve를 그리는 것입니다. Bradford법은 산성용액에서 Coomassie brilliant blue 염료가 단백질과 결합하여 최대 흡광도가 595 ㎚로 이동하는 원리를 이용합니다. 따라서 595 ㎚에서의 흡광도가 단백질 농도와 비례합니다. 이 방법은 빠르고 비단백질성분들에 의한 방해도 거의 없어 실험실에서 가장 자주 사용하는 단백질 정량법입니다. 2. 단백질 정량의 중요성 단백질 정량은 생화학 실험에서 기본이 되는 과정입니다....2025.01.15
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Lowry-Folin법을 이용한 단백질 정량 (생화학 실험)2025.01.161. 단백질 정량 실험 목적은 Lowry 방법으로 수용액에 녹아 있는 단백질의 양을 정량하는 것입니다. 이를 위해 표준 용액을 이용한 표준 곡선의 작성과 비색정량법을 습득합니다. Lowry 단백질 분석법은 강알칼리 조건에서 구리 이온과 펩타이드 결합의 반응, 그리고 Folin-Ciocalteu 시약과의 반응을 통해 단백질을 정량합니다. 이 방법은 트립토판, 시스테인, 티로신 등의 아미노산과 반응하여 발색되는 원리를 이용합니다. 2. 분광광도법 분광광도법은 물질에 의한 빛의 흡수 현상을 이용하여 화학물질의 양을 정량하는 방법입니다. ...2025.01.16
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단백질의 분리(생화학실험)2025.01.161. 단백질 단백질이란 생화학에서 생물의 몸을 구성하는 고분자 유기 물질이다. 수많은 아미노산의 연결체로 이루어져 있으며, 생물체 내의 구성 성분, 세포 안의 각종 화학반응의 촉매 역할(효소), 항체를 형성하여 면역을 담당하는 등 여러 가지 형태로 중요한 역할을 수행한다. 2. 단백질 추출 단백질을 추출하기 위해서는 버퍼를 넣고 세포나 조직을 깨뜨려줄 필요가 있다. 세포 및 조직을 깨트리는 방법에는 homogenization, sonication, french pressure cell, grinding, glass bead vort...2025.01.16
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A+ 생화학실험 <13주차. His6-tagged Protein Purification> 레포트2025.01.201. 단백질 정제 단백질 정제(Protein Purification)는 생물학적 연구 및 산업적 응용을 위하여 단백질을 혼합물로부터 분리하고 정제하는 과정이다. 이 과정은 일반적으로 여러 단계를 거치며, 각 단계에서는 단백질의 용해도, 크기, 전하, 결합 친화도 등의 단백질 간 서로 다른 특성을 활용하여 단백질을 분리한다. 첫 번째 단계는 세포 용해(Cell Lysis)로, 세포벽을 파괴하여 세포 내의 단백질을 방출하는 것이다. 다음 단계는 affinity chromatography이다. 이 방법은 특정 단백질에 결합하는 리간드를 ...2025.01.20
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