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플라스미드 DNA 정제2025.01.121. 플라스미드 DNA 분리 플라스미드 DNA는 재조합 DNA 조작을 위한 운반체 DNA로 사용되며, 대장균에 플라스미드를 삽입하는 과정을 Bacterial Transformation이라고 한다. 대장균 세포에는 플라스미드 DNA와 염색체 DNA가 독립적으로 존재하므로, 플라스미드 DNA를 따로 분리하는 과정을 Purification of plasmid DNA라고 한다. 알칼리 용해법(Alkali lysis)은 높은 pH의 알칼리성 용액을 사용하여 세포벽과 세포막을 용해시킨 후, 산성 용액을 처리하여 플라스미드 DNA만을 분리해내는...2025.01.12
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Cell harvest and protein assay2025.01.231. Cell harvest 세포 배양 시 adherent cell과 suspension cell로 구분할 수 있으며, adherent cell을 harvest하는 방법에는 화학적 방법(trypsin, accutase 사용)과 물리적 방법(scraper 사용)이 있다. 이번 실험에서는 물리적 방법인 scraper를 사용하여 adherent cell을 harvest하였다. 2. Protein extraction 세포 내 단백질을 추출하기 위해 lysis buffer와 phosphatase/protease inhibitor를 사용하여 ...2025.01.23
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SDS-PAGE를 이용한 AP 단백질 분석 및 Coomassie Blue Staining2025.01.171. SDS-PAGE를 이용한 단백질 분석 SDS-PAGE 실험을 통해 AP 단백질의 크기와 순도를 확인할 수 있었습니다. SDS-PAGE 과정에서 단백질의 3차 구조를 제거하고 크기에 따라 분리되도록 하여, 목표 단백질인 AP 단백질을 선별적으로 확인할 수 있었습니다. 또한 Coomassie Blue 염색을 통해 단백질 밴드를 시각화하여 분석할 수 있었습니다. 2. 단백질 정제 과정 단백질 정제 과정에서 target 단백질 이외의 비특이적으로 결합한 단백질들이 씻겨나가면서 target 단백질의 순도가 높아지는 것을 확인할 수 있었...2025.01.17
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아주대학교 A+ 생명과학 실험 효소반응2025.01.131. 효소 반응 이번 효소 반응 실험은 온도와 pH에 변화를 주면서 전분 분해효소 아밀라제가 활성화되는 최적의 조건을 찾는 실험을 진행하였다. 효소는 각각 최적의 온도와 pH가 있는데 실험에 사용한 아밀라제의 경우 이론 상 최적의 pH는 6.7~7이고, 알파 아밀라제는 36.5이고 베타 아밀라제는 55~65 이다. 실험 결과 pH와 온도 모두 이론값과 일치하는 것을 알 수 있었다. 다만 85도의 3pH에서도 흡광도가 비교적 큰 값이 나온 것은 실험 과정에서 오류가 발생했을 것으로 추정된다. 2. 아밀라제 아밀라제는 아밀레이스라고도 ...2025.01.13
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PCR을 이용한 유전자 증폭 실험 예비 보고서2025.01.031. PCR(중합효소 연쇄반응) PCR은 단백질(표적 핵산)을 증폭해서 검출하는 검사법으로, 두 개의 primer(시발체) 사이에 낀 DNA를 시험관 내에서 대량(20만~50만배)으로 증폭시킬 수 있는 혁명적인 방법입니다. PCR은 DNA의 해리(denaturation), primer와 주형 DNA의 결합(Annealing), DNA의 신장(Extension)의 3단계로 이루어지며, 이를 1 cycle로 하여 2의 제곱으로 증폭됩니다. PCR은 생물의 분류, 의료(유전병 진단), 범죄 수사(DNA 지문 분석) 등 DNA를 취급하는 ...2025.01.03
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양파 뿌리의 체세포 분열 관찰2025.05.031. 세포주기 세포주기는 세포가 성장하고 분열하면서 거치게 되는 많은 단계들을 말한다. 분열 중인 모세포에서 세포 한 개가 처음 생긴 시점부터 다시 2개의 세포로 분열되는 시점까지의 순차적인 사건이다. 세포주기는 DNA가 복제되는 성장기(간기), 세포분열이 일어나는 시기(M기)로 이루어져있다. 2. 체세포 분열 체세포 분열은 전기, 중기, 후기, 말기의 단계로 구분된다. 전기에는 핵과 세포질에 큰 변화가 생기고, 중기에는 방추체의 형성이 완전해지며, 후기에는 자매염색분체들이 서로 분리되는 과정이 일어난다. 말기에는 방추체 끝에 염색...2025.05.03
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Ion Exchange Column Chromatography2025.01.211. Alkaline Phosphatase (AP) Alkaline Phosphatase (AP)는 인산기(phosphate group)을 떼어내는 기능을 하며, alkaline condition에서 활성을 띠는 특징을 가진다. AP는 E. coli의 outer membrane과 inner membrane 사이의 periplasmic space에 존재한다. 2. Protein Purification AP를 정제하기 위해 osmotic shock, centrifuge, dialysis, heat inactivation 등의 과정을 거...2025.01.21
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세포 용해를 통한 단백질 추출2025.01.021. 세포 용해 방법 세포 용해(또는 세포 파괴)에 사용되는 다양한 물리적, 화학적 방법을 살펴보고, RIPA 용해 완충액을 사용하여 세포를 파괴하고 세포 단백질을 얻을 수 있다. RIPA 용해 완충액은 세포막, 핵막, 단백질 결합을 모두 분해할 수 있는 강한 계면활성제를 포함하고 있어 세포질, 핵 단백질 등 다양한 단백질을 추출할 수 있다. 2. 단백질 추출 과정 배양 중인 MCF-7 세포를 DPBS로 세척하고 세포 긁개로 세포를 모아 원심분리하여 세포 펠릿을 얻었다. 이 세포 펠릿에 RIPA 용해 완충액을 처리하여 세포를 용해하...2025.01.02
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[생명과학 동아리 실험 추천] 브로콜리/바나나 DNA 추출 실험 보고서2025.01.281. DNA 추출 이 실험은 일상생활에서 쉽게 접할 수 있는 식물체인 브로콜리와 바나나로부터 DNA를 추출하는 것을 목적으로 합니다. 실험에서는 소금, 계면활성제, 에탄올 등의 재료를 사용하여 DNA를 추출하고 관찰하는 과정을 설명하고 있습니다. 소금은 DNA와의 반발을 줄여 DNA가 잘 뭉치도록 하고, 계면활성제는 세포막을 파괴하여 DNA가 용액 속으로 나오도록 합니다. 에탄올은 DNA가 녹지 않는 성질을 이용하여 DNA를 표면으로 떠오르게 합니다. 2. 생명과학 실험 이 실험은 생명과학 동아리 활동의 일환으로 진행되었습니다. 실...2025.01.28
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동식물 세포관찰2025.01.131. 마이크로미터 사용법 광학 현미경, 대물 마이크로미터, 접안 마이크로미터를 이용하여 세포의 크기를 측정하는 방법에 대해 설명하고 있습니다. 대물 마이크로미터 한 눈금이 10마이크로미터이며, 배율에 따라 접안 마이크로미터 한 눈금의 길이가 달라지는 것을 설명하고 있습니다. 2. 동물세포 구조 동물세포의 주요 세포 소기관인 세포핵, 미토콘드리아, 세포막, 리보솜, 내막계(소포체, 골지체, 핵막, 리소좀, 소포, 원형질막) 등의 구조와 기능에 대해 설명하고 있습니다. 3. 식물세포 구조 식물세포만 가지는 세포 소기관인 엽록체와 세포벽...2025.01.13
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