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1. E.coli의 배양 조건 및 분열시간 2. E.coli 성장곡선 3. Lac operon 4. IPTG 5. 흡광도란2024.09.261. 세균의 성장 과정과 유전자 발현 조절 1.1. 일반적인 세균의 성장 곡선 일반적인 세균의 성장 곡선은 세균이 새로운 환경에 접종된 후 시간의 경과에 따른 세균 수의 변화를 나타낸 것이다. 이 곡선은 크게 4단계로 구분된다. 첫 번째 단계는 유도기(lag phase)로, 세균이 새로운 환경에 적응하는 시기이다. 이 기간 동안 세균 수의 증가는 거의 없으며, 세포 구조와 효소 합성 등이 이루어진다. 이 시기는 환경 조건에 따라 길이가 달라질 수 있다. 두 번째 단계는 지수기(exponential phase)로, 세균이 최적...2024.09.26
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대장균 배양 단백질 발현 실험 목적2024.09.261. 실험 개요 1.1. 실험 목적 실험 목적은 재조합 단백질(Naa30)을 정제하는 것이다. 세포는 여러 종류의 단백질을 만들어내는데, 이 중 특정한 단백질을 얻어내기 위해 단백질 정제가 이뤄진다. 내생적 단백질(endogenous)은 자연적으로 세포 내에 존재하지만 낮은 농도로 존재하기 때문에 상대적으로 정제가 어렵다. 반면 재조합 단백질(recombinant)은 외부 유전자를 플라스미드 벡터에 삽입하여 숙주 세포에 도입한 후 발현되는 단백질이다. 재조합 단백질은 과 발현이 가능하며 정제를 용이하게 하기 위해 태그(tag)를 ...2024.09.26
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Induction sds2024.10.171. 단백질 발현 분석 1.1. 실험 개요 실험 개요는 단백질 발현 분석을 위한 전반적인 실험 과정을 설명한다. 이 실험은 대장균(E. coli)에서 특정 유전자를 발현시켜 단백질을 생산하고, SDS-PAGE를 통해 발현된 단백질을 확인하는 것이 주요 목적이다. 우선, 대장균 세포에 목적 유전자가 도입된 발현 벡터를 형질전환하여 균주를 만든다. 이 균주를 배양하면서 IPTG를 처리하여 Lac operon 시스템을 활성화시켜 단백질 발현을 유도한다. 발현된 단백질은 세포 용해 과정을 거쳐 추출하고, SDS-PAGE를 통해 단백질...2024.10.17
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단백질 발현, 정제 보고서를 써줘2024.10.121. 생명과학실험Ⅰ 실험보고서 1.1. 실험배경 1.1.1. 세포 내 단백질 발현 세포 내 단백질 발현은 생명체의 기본적인 생명 활동을 이해하는 데에 매우 중요한 과정이다. 세포는 살아가기 위해 필요한 다양한 단백질을 끊임없이 합성하고 있으며, 이러한 단백질들은 세포 내에서 복잡한 네트워크를 이루며 상호작용하며 세포의 구조와 기능을 유지한다. 세포 내에서 원래부터 만들어지는 단백질을 내생적(endogenous) 단백질이라고 하며, 세포는 수만 개 이상의 다양한 내생적 단백질들을 끊임없이 생산해내고 있다. 이러한 내생적 단백질...2024.10.12
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특정 유전자를 선택하여 T-Vector에 삽입시키고 이를 E-Coli 내에 transformation 시켜 형질전환 박테리아를 선택적으로 배양2024.11.161. Transformation 조 1.1. 실험 목적 재조합된 DNA(eGFP DNA)를 Competent cell에 넣고, 배양된 Colony를 대조군과 비교함으로써 형질전환(Transformation)에 관하여 고찰해보는 것이 이 실험의 목적이다. 수용세포에 노출된 DNA가 흡수, 통합, 발현되는 과정을 나타내는 형질전환은 몇몇 박테리아 사이에서 자연적으로 일어나는 현상이다. 그러나 대장균을 포함한 다른 종들은 외부 DNA를 흡수할 능력이 없기 때문에 인공적인 방법으로 형질전환을 유도하게 된다. 이번 실험에서는 경쾌한 녹색...2024.11.16
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단백질 정제 및 발현에서 cell lysis와 sonication 보고서를 써줘2024.10.131. 단백질 정제 1.1. 실험배경 1.1.1. 재조합 단백질 발현 재조합 단백질 발현이란 외부 유전자를 플라스미드 벡터에 삽입한 후, 이를 숙주세포에 도입하여 단백질을 발현하는 기법이다. 이를 통해 내생적 단백질에 비해 훨씬 높은 양의 단백질을 생산할 수 있으며, 정제 및 검출을 위한 태그(tag)를 부착할 수 있다는 장점이 있다. 재조합 단백질 발현 실험에서 사용되는 pET28a 벡터는 kanamycin 항생제에 대한 저항성 유전자인 KanR을 갖고 있다. 따라서 배양액에 kanamycin을 첨가하면 KanR을 갖고 있는 ...2024.10.13
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SDS page2025.03.271. SDS PAGE의 원리 1.1. SDS PAGE 정의 및 특징 SDS PAGE는 Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis의 약어로, 단백질을 분리해내는 기술이다. 주로 내분비학, 유전학, 생화학, 분자생물학 등 단백질을 연구하는 학문에 많이 사용되며, 전기영동 이동성을 이용하여 단백질을 분리한다. 단백질의 전기영동 이동성은 polypeptide sequence의 길이, 분자량, 3차원 접힘 구조 등의 요인에 의해 나타나는 특성이다. 핵산 전기영동에서는 agaros...2025.03.27
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SDS page2025.03.271. SDS PAGE 1.1. SDS PAGE의 정의와 특징 SDS PAGE(Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis)는 단백질을 분리해내는 기술로, 전기영동 이동성을 이용하는 방법이다. 단백질을 구성하는 아미노산 서열의 길이, 분자량, 3차원 접힘 구조 등의 요인에 따라 나타나는 전기적 이동 특성을 이용하여 단백질을 분리할 수 있다. 핵산 전기영동에는 주로 아가로스 겔을 사용하지만, 단백질 전기영동에는 폴리아크릴아마이드 겔을 사용한다. 아크릴아마이드 단량체와 교차결합...2025.03.27
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SDS page2025.03.151. SDS PAGE 1.1. SDS PAGE 개요 SDS PAGE는 단백질을 분리하는 기술이다. 핵산을 전기영동할 때는 아가로스 겔을 주로 이용하지만, 단백질 전기영동에는 폴리아크릴아마이드 겔을 사용한다. 아크릴아마이드 단량체가 ammonium persulfate와 TEMED 효소의 촉매 반응을 통해 폴리아크릴아마이드로 중합되어 겔 구조를 형성한다. 이 반응은 효소 촉매 반응이므로 비가역적이다. SDS는 음이온성 계면활성제로, 단백질과 비가역적으로 결합하여 균일한 음전하를 띠게 한다. 이로써 단백질의 고유한 전하와 입체 구조...2025.03.15