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plasmid DNA 추출과 전기영동2024.10.061. 개요 1.1. Plasmid DNA의 정의와 특성 Plasmid DNA는 세균을 비롯한 많은 생물체에서 염색체 외부에 존재하는 고리형태의 이중나선 구조의 DNA 조각이다. 일반적으로 크기가 상대적으로 작고 자체적인 복제 능력을 가지고 있어 유전자 클로닝 등의 유전공학 분야에서 매우 유용한 벡터로 활용된다. Plasmid DNA는 대표적인 에피솜 DNA로, 크기가 1~1000 kilobase pairs 정도로 매우 다양하다. 세균 세포 내에서 염색체와는 별개로 독립적으로 존재하며, 일반적으로 세균의 생존에 필수적이지는 않지만...2024.10.06
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제한 효소와 소화 실험 보고서2024.09.191. 유전자 클로닝을 위한 제한효소 실험 1.1. 제한효소 EcoRI의 특성 EcoRI는 대장균의 플라스미드 RY13에서 코드되며 DNA의 특수한 6염기배열 5′-GAATTC-3′을 인식하여 다음과 같이 절단한다. 즉, 5′-인산과 3′-OH말단이 생성된다. EcoRI는 50mM NaCl, 100mM tris-HCl 완충액(pH 7.5), 5mM MgCl2액에서 최적반응조건을 나타낸다. 그러나 고농도의 글리세롤이나 저농도의 염분 조건에서는 스타 활성(AATT만 인식)이 나타나기 쉽다. EcoRI는 가격이 저렴하여 유전자지도만들기(...2024.09.19
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제한효소 및 소화 실험: 효소작용 영향2024.09.191. 제한효소와 DNA 절단 1.1. 제한효소의 종류와 특성 제한효소는 DNA의 특정한 염기배열을 식별하고 이중사슬을 절단하는 핵산분해효소(endonuclease)의 하나로서, 유전공학에서 재조합 DNA를 만들기 위해 사용하는 특수한 효소이다. 제한효소는 주로 세 가지 유형으로 분류된다. 첫째, Ⅰ형 제한효소는 인식하는 염기서열과 절단 위치가 다른 곳에 있어 연구에 부적합하다. 둘째, Ⅱ형 제한효소는 특정 염기서열을 인식하여 이를 정확히 절단하는 특성을 가지고 있어 유전자 조작에 주로 사용된다. 이 제한효소는 인식하는 염기서열이...2024.09.19
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E.coli로부터 DNA purification2024.10.091. TA Cloning 및 형질전환 1.1. TA Cloning TA Cloning은 Taq DNA Polymerase가 PCR 산물의 3' 말단에 Adenine(A) 염기를 부가하는 특성을 이용하여 클로닝하는 방법이다. Taq Polymerase는 복제 과정에서 3' 말단에 A 염기를 붙이게 되는데, 이를 이용하여 T 염기가 돌출된 선형화된 벡터에 PCR 산물을 결합시키는 것이다. 이는 벡터와 삽입유전자 간 결합을 용이하게 하여 클로닝 효율을 높일 수 있다는 장점이 있다. TA Cloning의 과정은 다음과 같다. 먼저 Ta...2024.10.09