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이화여대 생명과학실험 A+ 리포트(Realtime PCR을 이용한 유전자 발현 분석)2025.01.231. RNA sequencing RNA sequencing은 DNA로부터 전사되는 모든 RNA 전사체의 염기서열을 차세대 분석기술을 사용하여 분석하는 기술이다. RNA sequencing을 위해서는 cDNA가 필요한데 cDNA를 준비하는 일반적 과정은 보통 RNA 추출>RNA 선택>cDNA 합성>라이브러리 제작으로 이루어진다. RNA 염기서열 분석 기술을 통해 alternative RNA splicing, 유전자의 발현량, 염기서열의 변이, gene fusion, single nucleotide polymorphism, SNP 등의...2025.01.23
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Real-time PCR을 이용한 유전자 발현 분석2025.01.231. 전사(Transcription) 수준에서의 유전자 발현 분석 기법들 유전자 발현 분석 기법에는 Single gene analysis와 Whole genome analysis가 있다. Single gene analysis는 개별 유전자의 발현량을 확인하는 실험 기법으로 Northern Blotting과 Real-time PCR이 있다. Whole genome analysis는 세포 내 전체 유전자의 발현량을 확인하는 실험 기법으로 RNA sequencing이 있다. 2. cDNA 합성에 사용될 수 있는 primer의 종류 cDN...2025.01.23
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생물공정실험 예비보고서_RNA Extraction and Quantification2025.01.071. 유전자 발현과 조절 유전자 발현 경로는 전사와 번역으로 나뉘며, 전사 개시, 전사 후 가공, 번역 단계에서 조절될 수 있다. 전사 활성은 크로마틴 구조 변화, 전사인자 결합 등으로 조절되며, 전사 후에는 mRNA 가공, 번역에서는 mRNA 사용 속도 조절 등으로 이루어진다. 2. TRIzol을 이용한 RNA 추출 TRIzol 시약은 페놀-구아니딘 이소티오시아네이트로 구성되어 세포막을 파괴하고 RNase를 억제하여 RNA를 선택적으로 추출할 수 있다. 세포 용해액을 원심분리하면 RNA가 수용층에 존재하게 되며, 이후 isopro...2025.01.07
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RNA 추출, cDNA 합성 및 qRT-PCR2025.01.181. PCR (Polymerase Chain Reaction) PCR은 DNA의 상보적 가닥에 결합하는 2개의 프라이머를 동시에 사용하여 증폭을 원하는 DNA의 특정 영역만을 in vitro에서 복제, 증폭하는 기술이다. 3단계를 거쳐 DNA를 복제하는데, 변성, 결합, 신장 과정을 반복하여 DNA를 증폭시킨다. 2. RT-PCR (Reverse Transcriptase PCR) RT-PCR은 유전자에서 만들어진 RNA에서 역전사효소를 이용하여 cDNA를 생성한 후, cDNA를 주형 가닥으로 PCR을 수행하여, 유전자의 RNA 발현...2025.01.18