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제한효소를 이용한 DNA 절단 및 전기영동법과 PCR에 의한 DNA 분리 및 확인2025.01.071. PCR PCR의 기본 원리는 DNA를 단일가닥으로 열변성시킨 후 올리고뉴클레오티드를 결합시키고 DNA 중합효소로 DNA를 합성하는 과정을 반복하여 DNA를 증폭하는 것입니다. PCR에 필요한 주요 요소로는 주형 DNA, 시발체, dNTPs, Taq 중합효소, MgCl2 등이 있으며, 이들의 농도와 반응 조건을 최적화하는 것이 중요합니다. PCR 산물은 전기영동으로 확인할 수 있습니다. 2. 전기영동 전기영동은 DNA 분자의 크기와 전하에 따라 이동 속도가 달라지는 원리를 이용하여 DNA 단편을 분리하는 기술입니다. 아가로스 겔...2025.01.07
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아주대학교 생물학실험1 (A+보고서) DNA추출2025.01.101. 원핵세포와 진핵세포의 차이 원핵세포는 DNA가 코일 모양으로 감겨 핵과 핵양체를 이루고 있으며 핵막이 없어 DNA가 세포질로 노출되어 있다. 또한 리보솜의 크기도 진핵세포에 비해 작다. 이러한 이유로 사람 몸에 박테리아가 침입하면 항생제를 먹더라도 우리 몸에 있는 여러 유용 세포들의 단백질 합성에 영향을 주지 못한다. 원핵세포는 편모가 있어 이동이 가능하다는 점에서 진핵세포와 다르지만, 두 세포 모두 원형질 막으로 둘러싸여 있으며 DNA형태의 염색체를 갖는다는 공통점이 있다. 2. 플라스미드 DNA 박테리아 같은 원핵생물들은 ...2025.01.10
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PCR 분자 마커에 의한 식물병원균 동정2025.01.141. 미생물 분류 미생물은 지권, 수권, 기권의 다양한 환경 조건에서 풍부한 현존량으로 환경의 항산성 유지와 물질 순환에 중심적인 역할을 하고 있으며 식물병원체의 감염, 항생물질 생산, 자연 정화 및 식량자원 등 유용‧유해한 역할을 담당하고 있다. 미생물의 분류는 현미경과 배양적 특성 및 이화학적 특성에 의존하여 현재까지 분류체계가 지속되고 있다. 2. PCR 기술 PCR은 표적 핵산을 증폭하여 검출하는 검사법으로 1988년 Saiki에 의해 온천 지역과 같은 고온에서 생육하는 세균인 Thermus aquotus로부터 열에 안정한 ...2025.01.14
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생명과학실험1 SDS-PAGE & Coomassie blue Staining2025.01.131. SDS의 역할 및 원리 SDS(sodium dodecyl sulfate)는 계면활성제의 일종으로 단백질이나 핵산의 구조를 깨뜨려 선형으로 만들어주는 역할을 한다. 아미노산의 소수성 부분과 hydrophobic interaction을 하며 결합하는데, 아미노산 2개당 1개 정도 binding하여 단백질을 변성한다. 2. Gel에 들어가는 시료의 역할 ① Tris-HCl: Stacking gel과 Resolving gel의 pH를 다르게 하여 각 gel에서 Glycine의 charge 다르게 조정해준다. 또한 Cl-를 첨가해주어서...2025.01.13
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Gel 제조 (SDS-PAGE 실험을 위한 사전 준비) 보고서2025.01.131. 전기영동 전기영동은 DNA와 단백질과 같은 생체 고분자들을 분리 및 정제하는 방법입니다. 전기영동 원리는 음전하를 띄고 있는 생체고분자(DNA/단백질)들에게 전기적 힘(-음전하 ->＋양전하)을 가해주어, 물질이 사이즈에 따라 분리되는 것입니다. DNA 전기영동과 단백질 전기영동(SDS-PAGE)의 차이는 DNA는 음전하를 띄고 있어 Agarose(한천) Gel에서 관찰할 수 있지만, 단백질은 양, 음전하를 갖고 있어 SDS-sample buffer와의 혼합이 필요하며 Poly Acrylamide gel에서 관찰할 수 있습니다....2025.01.13
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PCR 기반 Specific Human DNA 증폭 및 검출 결과 보고서2025.01.151. PCR 기반 Specific Human DNA 증폭 및 검출 이 보고서는 PCR 기술을 사용하여 특정 인간 DNA를 증폭하고 검출하는 실험 결과를 설명합니다. 실험에서는 구강 상피 세포에서 DNA를 추출하고, 특정 프라이머를 사용하여 DNA를 증폭한 후 전기영동을 통해 분석했습니다. 실험 결과, 두 개의 샘플에서 250bp 부근에서 강한 발현이 관찰되었으며, 이 중 하나는 wild type, 다른 하나는 mutant type의 DNA인 것으로 확인되었습니다. 이 실험을 통해 PCR의 기본 원리와 UV-transilluminat...2025.01.15
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DNA 제한효소2025.01.151. 제한효소 제한효소는 세균이 박테리오파지의 공격을 받으면 생산하는 효소로 이중 나선의 DNA의 특정한 염기서열을 인식해 그 부분의 절단에 있어 촉매작용을 하는 효소이다. 대부분의 제한효소는 인식자리(recognition site) 또는 제한 자리(restriction site)라는 특정한 염기서열이 있는 자리에서 DNA를 절단한다. 제한효소는 회문이라는 양 사슬의 5'부터 3' 방향으로 똑같은 서열을 가진 DNA의 부위를 인식해 작용한다. 제한효소가 DNA를 절단하면 이중 가닥 중 한 가닥이 돌출된 형태를 띠는데 이를 점착 말단...2025.01.15
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미세조류의 DNA 추출2025.01.131. PCR (중합효소 연쇄반응) PCR은 시험관 내에서 DNA 분자의 특정 염기 서열을 선택적으로 빠르게 증폭하는 기술로, DNA 변성, 프라이머 결합, DNA 합성의 3단계로 이루어집니다. PCR은 유전자 연구, 질병 진단 등 다양한 분야에 활용되고 있습니다. 2. DNA 추출 DNA 추출은 생물로부터 전체 유전체 DNA를 추출하는 과정으로, 이번 실험에서는 spin column 방식을 사용하였습니다. 세포 용해, DNA 결합, 세척, 용출의 단계를 거쳐 DNA를 추출하였습니다. 3. 전기영동 전기영동은 DNA 분자를 크기에 따...2025.01.13
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세포생리학실험_cell culture, Genomic DNA Isolation_genomic DNA 추출, total RNA 추출, 전기영동2025.01.131. 세포 배양 HEK 293T 세포를 DMEM 배지와 FBS를 사용하여 배양하였다. 세포는 처음에는 동글동글한 모양이었지만 점차 바닥에 붙어 자라나면서 별모양의 형태를 띠었다. 배지의 색이 점점 노란색으로 변하면서 세포가 죽기 시작하였다. 이를 통해 세포가 일정 횟수의 분열을 한 후 노화되는 과정을 관찰할 수 있었다. 2. Genomic DNA 추출 HEK293T 세포에서 genomic DNA를 추출하였다. 세포를 용해시킨 후 단백질과 RNA를 제거하는 과정을 거쳐 순수한 DNA를 분리하였다. 전기영동 결과 DNA 밴드가 마커보다...2025.01.13
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전기영동 결과보고서2025.01.121. 전기영동 전기영동은 DNA, RNA, 단백질 등의 생물학적 거대분자를 분리하는 데 사용되는 기술입니다. 이번 실험에서는 Agarose gel을 사용하여 PCR 증폭 산물을 전기영동으로 분리하였습니다. 전기영동 과정에서 주의해야 할 점으로는 TAE 완충액의 적절한 양 유지, 전기영동 시간 관리, 시료 주입 시 gel 판 손상 방지 등이 있습니다. 또한 Polyacrylamide gel을 사용하는 실험도 있으며, 이는 단백질 분리나 작은 크기의 DNA 분리에 주로 사용됩니다. 2. PCR PCR(Polymerase Chain Re...2025.01.12
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