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단백질 전기영동 실험2025.11.141. SDS-PAGE (Sodium Dodecyl Sulfate - Polyacrylamide Gel Electrophoresis) SDS-PAGE는 단백질의 분자량을 결정하고 단위체의 수와 크기를 파악하는 데 사용되는 전기영동 기법입니다. SDS는 단백질에 음전하를 제공하여 단백질의 고유한 3차 구조를 선형 상태로 변환시킵니다. 이를 통해 단백질의 이동속도가 분자량에만 의존하도록 하며, 분자량이 작을수록 빠르게 이동합니다. 마커 단백질과 비교하여 미지의 단백질 분자량을 확인할 수 있습니다. 2. 전기영동법의 원리 전기영동법은 직류...2025.11.14
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탄수화물의 검정 결과레포트2025.11.141. 탄수화물의 분류 및 구조 탄수화물은 탄소, 수소, 산소로 이루어진 Cn(H2O)m 구조의 화합물이다. 단당류, 이당류, 다당류로 분류되며, 단당류는 더 이상 분해되지 않는 기본 단위이고, 이당류는 두 개의 단당류가 결합한 분자, 다당류는 여러 단당류가 연속적으로 결합한 중합체이다. 포도당, 과당, 갈락토스는 대표적인 단당류이고, 수크로스, 락토스, 말토스는 주요 이당류이며, 녹말, 글리코겐, 셀룰로스가 대표적인 다당류이다. 2. 환원당과 베네딕트 반응 환원당은 유리 알데히드기 또는 케톤기를 가진 당으로 환원성을 나타낸다. 베네...2025.11.14
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단백질 정량법 비교: BCA와 Bradford 분석2025.11.161. BCA Assay (Bicinchoninic Acid Assay) BCA assay는 562nm 파장에서 흡광도를 측정하여 단백질을 정량하는 방법입니다. 보랏빛 착물 생성량이 증가할수록 흡광도 값이 커지며, 흡광도와 단백질 양이 비례합니다. Working Reagent는 MA, MB, MC를 25:24:1의 부피비로 혼합하여 제조하며, 60°C에서 1시간 반응시킵니다. 본 실험에서 미지시료의 평균 농도는 1.196 μg/ml로 측정되었습니다. 2. Bradford Assay Bradford assay는 Coomassie bri...2025.11.16
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SDS-PAGE를 이용한 단백질 크기 분석2025.11.161. SDS-PAGE 원리 SDS-PAGE는 단백질에 음이온 계면활성제인 SDS(Sodium Dodecyl Sulfate)를 처리하여 단백질을 1차 구조로 변성시키고 음전하를 띠게 한 후, 전기장을 가해 polyacrylamide gel 내에서 단백질을 이동시켜 크기를 측정하는 방법이다. SDS는 단백질의 비공유 상호작용을 끊고 단백질의 원래 전하보다 훨씬 강한 음전하를 부여하여 단백질의 질량에 비례하는 분리를 가능하게 한다. 2. 실험 결과 및 해석 본 실험에서 Protein A는 46kDa, Protein B는 56kDa로 측정...2025.11.16
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Bradford Assay를 이용한 단백질 정량 실험2025.12.091. Bradford Assay 원리 Bradford assay는 Coomassie Brilliant Blue G-250 염료를 이용하여 단백질 농도를 측정하는 방법입니다. 산성 조건에서 염료는 적색을 띠다가 단백질과 결합하면 청색으로 변합니다. 단백질의 양전하 아미노산(아르기닌, 라이신)과 방향족 아미노산이 염료와 이온결합 및 소수성 상호작용을 형성하면서 전자 구조가 변화하여 595nm 파장에서 최대 흡광도를 보입니다. 단백질 농도가 높을수록 더 많은 염료가 결합하여 흡광도가 비례적으로 증가합니다. 2. Bradford Reage...2025.12.09
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PCR 및 아가로스 겔 전기영동 생화학 실험2025.12.091. PCR (중합효소 연쇄반응) PCR은 Polymerase Chain Reaction의 약자로, 2개의 프라이머 사이에 낀 DNA 부분을 시험관 내에서 대량으로 증폭시키는 방법이다. 1985년 Kary B. Mullis 박사에 의해 개발되었으며, DNA 변성(92℃), 프라이머 결합(55℃), DNA 신장(72℃)의 세 단계로 진행된다. 한 번의 반복마다 DNA 양이 2배로 증가하며, 10번 반복 시 원래 양의 1000배 이상의 DNA가 생성된다. 범죄수사, 게놈 연구, 유전질환 진단, 감염성 질환 진단 등에 광범위하게 활용된다...2025.12.09
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제한효소 절단 및 아가로스 겔 전기영동 실험2025.12.091. 제한효소(Restriction Enzyme) 제한효소는 DNA의 특정 염기서열을 인식하여 이중사슬 구조를 절단하는 효소이다. 1960년대 베르너 아르버와 매튜 매셀슨에 의해 명명되었으며, 4~8개 염기쌍으로 이루어진 회문구조를 인식한다. 절단 방식에 따라 점착성 말단(sticky end)과 비점착성 말단(blunt end)으로 분류되며, 1~5형으로 구분된다. 2형 제한효소는 DNA 재조합기술에 가장 일반적으로 사용되며, Mg2+를 보조인자로 필요로 한다. 2. DNA 연결효소(DNA Ligase) DNA 연결효소는 뉴클레오타...2025.12.09
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SDS-PAGE를 이용한 단백질 분리 및 검출2025.12.091. SDS-PAGE (Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis) SDS-PAGE는 SDS를 사용하여 단백질을 변성시키고 크기를 기준으로 분리하는 전기영동 기법입니다. SDS는 양친매성 물질로 단백질의 비공유 결합을 파괴하여 3차원 구조를 잃게 만들고, 동일한 질량 당 전하 비율을 가지게 하여 크기 기준으로 분리가 가능하게 합니다. 이 실험에서는 GFP 단백질을 Anion exchange chromatography로 정제한 후 SDS-PAGE를 통해 분석하였으며, 예상 ...2025.12.09
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SDS-PAGE를 이용한 단백질 분리 및 분석2025.12.091. SDS (Sodium Dodecyl Sulfate) SDS는 화학식 CH3(CH2)11SO4Na를 가진 유기황 산염 화합물로, 양친매성 구조를 띠며 12개의 탄소 사슬로 된 소수성 꼬리와 친수성 머리를 가지고 있다. 단백질과 결합하여 변성을 유발하며, 비공유 결합을 파괴하여 모든 단백질이 동일한 질량 당 전하 비율을 가지게 함으로써 단백질의 크기만을 기준으로 분리할 수 있게 한다. RNA 및 DNA 추출과정에서 세포 용균으로도 사용된다. 2. Polyacrylamide Gel Acrylamide와 가교제인 N,N'-methyl...2025.12.09
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단백질 정량법 비교: BCA와 Bradford 방법2025.12.091. BCA Assay (Bicinchoninic Acid) 단백질이 구리 이온을 1가 양이온으로 환원시키는 성질을 이용한 정량법이다. 환원된 구리 이온은 BCA 분자 2개와 반응하여 보랏빛 착물을 형성하며, 562nm 파장에서 흡광도를 측정한다. 장점은 버퍼 물질 간섭이 적고, 높은 온도에서 민감하고 빠른 반응을 하며, 계면활성제와 함께 사용 가능하고 반응 시약이 안정적이다. 단점은 실온에서 다량의 단백질 정량 시 반응이 완전하지 않을 수 있고, 농축된 샘플은 희석이 필요하며, 단백질 성질이 변할 수 있다. 2. Bradford ...2025.12.09
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