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A+ 생화학실험 <13주차. His6-tagged Protein Purification> 레포트2025.01.201. 단백질 정제 단백질 정제(Protein Purification)는 생물학적 연구 및 산업적 응용을 위하여 단백질을 혼합물로부터 분리하고 정제하는 과정이다. 이 과정은 일반적으로 여러 단계를 거치며, 각 단계에서는 단백질의 용해도, 크기, 전하, 결합 친화도 등의 단백질 간 서로 다른 특성을 활용하여 단백질을 분리한다. 첫 번째 단계는 세포 용해(Cell Lysis)로, 세포벽을 파괴하여 세포 내의 단백질을 방출하는 것이다. 다음 단계는 affinity chromatography이다. 이 방법은 특정 단백질에 결합하는 리간드를 ...2025.01.20
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[만점 레포트] 연세대학교 생화학실험(1) 3주차 아미노산의 분리 및 정성분석2025.05.041. 아미노산의 분리 및 정성분석 이 실험에서는 Ninhydrin 반응을 이용하여 아미노산, 펩타이드, 단백질의 발색 특성을 관찰하고, 종이 크로마토그래피와 전기영동을 통해 아미노산을 분리 및 정성 분석하는 방법을 익히는 것이 목적입니다. 실험 결과를 통해 Ninhydrin 반응의 원리, 아미노산의 분리 및 정성 분석 방법, 펩타이드의 전기이동도 차이 등을 이해할 수 있습니다. 2. Ninhydrin 반응 Ninhydrin은 아미노산, 펩타이드, 단백질과 반응하여 특유의 발색 반응을 일으킵니다. 이 반응은 pH 4~8, 100°C ...2025.05.04
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[생화학실험]단백질 정량(Lowry 법)2025.05.041. 단백질 정량(Lowry법) Lowry법은 알칼리성에서 단백질의 peptide 결합과 구리가 반응하여 Cu^{2+} 이온을 생성하는 Biuret 반응의 원리를 이용한 것이다. Cu^{2+} 이온은 방향족 아미노산의 산화를 유도하여 phospomolybdotungstate를 푸른색의 heteropolymolybdnum으로 환원시켜 강한 푸른색을 생성한다. 이 방법은 단백질의 농도가 0.01～1.0㎎/㎖의 경우에 측정 가능하다. 2. Biuret 반응 두 개 이상의 펩티드 결합을 갖는 화합물들은 알칼리성 용액에서 황산구리로 처리하면...2025.05.04
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전기영동을 이용한 단백질의 관찰(생화학실험)2025.01.161. 전기영동 전기영동은 전극 사이의 전기장 하에서 용액 속의 전하가 반대 전하의 전극을 향하여 이동하는 화학현상이다. 겔 전기영동법은 전기영동 현상을 단백질 분석에 응용한 초기 형태로, 단백질 크기에 따라 분리가 가능하다. 전기영동 실험에서는 SDS 처리를 통해 단백질의 전하를 균일하게 만들어 오직 크기에 따른 분리가 이루어지도록 한다. 또한 isoelectric focusing과 2D 전기영동법 등 다양한 전기영동 기법이 있다. 2. 겔 제조 겔은 acrylamide와 bisacrylamide를 혼합하여 중합 반응을 통해 만든다...2025.01.16
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형광 염색과 형광 현미경을 통한 세포의 관찰(생화학실험)2025.01.161. 형광 염색 형광 염색 시약은 생물학적 샘플에 특정 형광 신호를 부여하여, 현미경 등의 장비를 통해 연구자들이 생물학적 샘플 내에서 특정 대상을 더 쉽게 식별하고 분석할 수 있게 돕는다. 형광 염색을 하는 이유는 형광 염색이 세포 내 특정 구조나 분자를 명확하게 식별하고, 그 위치와 양을 정량화하는 데 유용하기 때문이다. 예를 들어 핵산을 염색시키면 세포의 핵을 명확하게 식별할 수 있고 세포질의 단백질을 염색시키면 세포질을 명확히 식별할 수 있게된다. 또한 형광 염색을 통해 세포 분열, 단백질 발현, 세포 사멸 등과 같은 생물학...2025.01.16
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헤모글로빈 측정 시험2025.01.131. 헤모글로빈 측정 헤모글로빈(Hb)의 농도를 측정하는 실험이다. 헤모글로빈 농도 측정은 빈혈을 진단하는 필수적인 생화학적 조사 방법이며, 적혈구 증가증의 중요한 지표가 되므로 헤모글로빈 농도 측정 실험을 숙지할 수 있어야 한다. 또한 많은 실험에서 사용되는 micro 피펫의 사용법을 숙지한다. 2. 분광광도계 사용 분광광도계는 빛을 이용하여 투과/반사율 등을 측정하여 샘플과 미지 시료의 구성, 농도 등을 측정할 수 있는 기계로서 광원, 검출기, 단색 화장치로 구성되어 있다. 분광광도계를 사용하여 시료의 흡광도를 측정할 때는 반드...2025.01.13
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Bradford법을 이용한 단백질의 정량 분석2025.01.151. 단백질 정량 분석 실험 목적은 Bradford법을 이용하여 단백질 정량을 하고 Standard curve를 그리는 것입니다. Bradford법은 산성용액에서 Coomassie brilliant blue 염료가 단백질과 결합하여 최대 흡광도가 595 ㎚로 이동하는 원리를 이용합니다. 따라서 595 ㎚에서의 흡광도가 단백질 농도와 비례합니다. 이 방법은 빠르고 비단백질성분들에 의한 방해도 거의 없어 실험실에서 가장 자주 사용하는 단백질 정량법입니다. 2. 단백질 정량의 중요성 단백질 정량은 생화학 실험에서 기본이 되는 과정입니다....2025.01.15
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Lowry-Folin법을 이용한 단백질 정량 (생화학 실험)2025.01.161. 단백질 정량 실험 목적은 Lowry 방법으로 수용액에 녹아 있는 단백질의 양을 정량하는 것입니다. 이를 위해 표준 용액을 이용한 표준 곡선의 작성과 비색정량법을 습득합니다. Lowry 단백질 분석법은 강알칼리 조건에서 구리 이온과 펩타이드 결합의 반응, 그리고 Folin-Ciocalteu 시약과의 반응을 통해 단백질을 정량합니다. 이 방법은 트립토판, 시스테인, 티로신 등의 아미노산과 반응하여 발색되는 원리를 이용합니다. 2. 분광광도법 분광광도법은 물질에 의한 빛의 흡수 현상을 이용하여 화학물질의 양을 정량하는 방법입니다. ...2025.01.16
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생화학 실험/실습 보고서 (아미노산의 적정)2025.01.231. 아미노산 적정 이 실험의 목적은 미지의 아미노산 용액을 염기성 용액으로 적정하여 적정 곡선을 통해 어떤 아미노산인지 확인하는 것입니다. 실험 방법은 0.2M NaOH 용액을 제조하고 pH 미터를 보정한 후, 0.1M 미지 아미노산 용액 A 10mL에 NaOH 용액을 0.5mL씩 떨어뜨리면서 pH를 측정하여 적정 그래프를 그리고 대략적인 pKa값과 당량점, 사용한 아미노산이 Lysine, Phenylalanine, Aspartic acid 중 하나인지 확인하는 것입니다. 1. 아미노산 적정 아미노산 적정은 아미노산의 농도를 정확...2025.01.23
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Lowry-Folin법을 이용한 단백질 정량2025.01.231. 단백질 정량 이 실험의 목적은 Lowry-Folin법을 이용하여 수용액에 녹아있는 단백질을 정량하고 흡광도 그래프를 그리는 방법을 익히는 것입니다. 실험 방법에는 BSA 표준곡선 작성, 미지의 단백질 시료 측정, 흡광도 측정 및 분석 등의 단계가 포함되어 있습니다. 2. Lowry-Folin법 Lowry-Folin법은 단백질 정량에 널리 사용되는 방법으로, 구리 이온과 단백질의 반응을 통해 청색 발색 반응이 일어나는 원리를 이용합니다. 이 실험에서는 BSA 표준용액을 이용하여 표준곡선을 작성하고, 미지의 단백질 시료의 농도를 ...2025.01.23
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