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단백질 분석(SDS-PAGE & Fluorescence)2025.05.141. SDS-PAGE SDS-PAGE는 Sodium dodecyl sulfate - polyacrylamide gel eletrophoresis의 약자로, 5~250 kDa 사이의 단백질을 분리할 때 사용되는 방법입니다. SDS는 단백질에 결합하여 전하의 영향을 배제하고 크기에 의해 이동속도가 결정되도록 합니다. 또한 DTT와 같은 reducing agent는 단백질의 disulfide bond를 변성시켜 linear한 1차 구조로 만듭니다. SDS-PAGE 후 단백질을 확인하기 위해 Coomassie Briliant Blue, s...2025.05.14
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[생화학실험] A+, 동물세포 배양 및 세포계수2025.01.031. 효소 반응 및 활성 이 실험에서는 효소인 트립신을 이용하여 우유의 주요 단백질인 카제인을 분해하는 과정을 관찰하였다. 온도에 따른 트립신의 활성을 확인하였는데, 0°C에서는 거의 활성이 없었고 37°C와 65°C에서는 카제인이 분해되어 우유의 투명도가 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 이를 통해 효소 반응에 영향을 미치는 요인 중 온도의 중요성을 알 수 있었다. 2. 단백질 분해 효소 이번 실험에서 사용된 트립신은 단백질을 펩티드로 가수분해하는 효소이다. 트립신은 아르기닌, 리신 등의 C말단 펩티드 결합을 절단하는 엔도펩티다아...2025.01.03
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대장균에서 재조합 단백질의 생산과 Western blot에 관한 실험2025.01.131. IPTG IPTG는 대장균 lactose operon의 효소합성을 유도하는 강력한 유도물질이다. 보통 유도물질은 operon의 활동에 의해 만들어지는 β-D-galactosidase에 의해 대사 이용하는 것이 많지만, IPTG는 분해되지 않아 비대사성 유도물질이라고도 불린다. 또한, 고농도로 사용시 galactoside permease가 없는 세포에도 투과할 수 있기 때문에 permease가 없는 균주에서의 유도실험에도 사용된다. 2. Buffer condition Tank buffer에는 glycine과 Cl-(Tris-ba...2025.01.13
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헤모글로빈 측정 시험2025.01.131. 헤모글로빈 측정 헤모글로빈(Hb)의 농도를 측정하는 실험이다. 헤모글로빈 농도 측정은 빈혈을 진단하는 필수적인 생화학적 조사 방법이며, 적혈구 증가증의 중요한 지표가 되므로 헤모글로빈 농도 측정 실험을 숙지할 수 있어야 한다. 또한 많은 실험에서 사용되는 micro 피펫의 사용법을 숙지한다. 2. 분광광도계 사용 분광광도계는 빛을 이용하여 투과/반사율 등을 측정하여 샘플과 미지 시료의 구성, 농도 등을 측정할 수 있는 기계로서 광원, 검출기, 단색 화장치로 구성되어 있다. 분광광도계를 사용하여 시료의 흡광도를 측정할 때는 반드...2025.01.13
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전기영동을 이용한 단백질의 관찰(생화학실험)2025.01.161. 전기영동 전기영동은 전극 사이의 전기장 하에서 용액 속의 전하가 반대 전하의 전극을 향하여 이동하는 화학현상이다. 겔 전기영동법은 전기영동 현상을 단백질 분석에 응용한 초기 형태로, 단백질 크기에 따라 분리가 가능하다. 전기영동 실험에서는 SDS 처리를 통해 단백질의 전하를 균일하게 만들어 오직 크기에 따른 분리가 이루어지도록 한다. 또한 isoelectric focusing과 2D 전기영동법 등 다양한 전기영동 기법이 있다. 2. 겔 제조 겔은 acrylamide와 bisacrylamide를 혼합하여 중합 반응을 통해 만든다...2025.01.16
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단백질의 정량실험 Lowry method2025.01.201. 단백질 정량 단백질 정량은 시료 내에 포함된 단백질의 양 또는 농도를 구하는 과정이다. 단백질을 가수분해하면 peptide bond가 끊어지면서 아미노산이 유리된다. 단백질의 본질, 시료에 있는 다른 성분들의 특성, 정량분석의 신속도 및 정밀도 등에 따라 적당한 방법을 선택해야 한다. Lowry 법은 Biuret 반응과 Folin-Ciocalteu 반응을 이용하여 단백질을 정량하는 방법으로, 감도가 비교적 넓고 오랫동안 광범위하게 이용되고 있다. 2. Lowry 법 Lowry 법은 알칼리성 용액에서 단백질의 펩티드 결합과 구리...2025.01.20
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A+ 생화학실험 <13주차. His6-tagged Protein Purification> 레포트2025.01.201. 단백질 정제 단백질 정제(Protein Purification)는 생물학적 연구 및 산업적 응용을 위하여 단백질을 혼합물로부터 분리하고 정제하는 과정이다. 이 과정은 일반적으로 여러 단계를 거치며, 각 단계에서는 단백질의 용해도, 크기, 전하, 결합 친화도 등의 단백질 간 서로 다른 특성을 활용하여 단백질을 분리한다. 첫 번째 단계는 세포 용해(Cell Lysis)로, 세포벽을 파괴하여 세포 내의 단백질을 방출하는 것이다. 다음 단계는 affinity chromatography이다. 이 방법은 특정 단백질에 결합하는 리간드를 ...2025.01.20
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A+ 생화학실험 <2주차. Pipetting & 50X TAE buffer preparation> 레포트2025.01.201. Pipetting Pipet은 액체의 부피를 정확하게 측정하고, 이동하기 위해 사용하는 실험 기구이다. 일반적으로 pipet은 대기압과 실험자가 조작하는 압력의 차이를 활용한다. 실험자가 pipet의 상단을 조작하여 내부 압력을 조절함으로써, 액체가 pipet 내부로 들어오거나 나가게 된다. Pipet에는 다양한 유형과 용량이 있으며, 사용 목적에 맞게 선택할 수 있다. Pasteur pipet, Graduated pipet, Volumetric pipet, Micropipette 등이 있으며, 각각의 특징과 용도가 다르다. ...2025.01.20
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Lowry-Folin법을 이용한 단백질 정량2025.01.231. 단백질 정량 이 실험의 목적은 Lowry-Folin법을 이용하여 수용액에 녹아있는 단백질을 정량하고 흡광도 그래프를 그리는 방법을 익히는 것입니다. 실험 방법에는 BSA 표준곡선 작성, 미지의 단백질 시료 측정, 흡광도 측정 및 분석 등의 단계가 포함되어 있습니다. 2. Lowry-Folin법 Lowry-Folin법은 단백질 정량에 널리 사용되는 방법으로, 구리 이온과 단백질의 반응을 통해 청색 발색 반응이 일어나는 원리를 이용합니다. 이 실험에서는 BSA 표준용액을 이용하여 표준곡선을 작성하고, 미지의 단백질 시료의 농도를 ...2025.01.23
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[만점 레포트] 연세대학교 생화학실험(1) 3주차 아미노산의 분리 및 정성분석2025.05.041. 아미노산의 분리 및 정성분석 이 실험에서는 Ninhydrin 반응을 이용하여 아미노산, 펩타이드, 단백질의 발색 특성을 관찰하고, 종이 크로마토그래피와 전기영동을 통해 아미노산을 분리 및 정성 분석하는 방법을 익히는 것이 목적입니다. 실험 결과를 통해 Ninhydrin 반응의 원리, 아미노산의 분리 및 정성 분석 방법, 펩타이드의 전기이동도 차이 등을 이해할 수 있습니다. 2. Ninhydrin 반응 Ninhydrin은 아미노산, 펩타이드, 단백질과 반응하여 특유의 발색 반응을 일으킵니다. 이 반응은 pH 4~8, 100°C ...2025.05.04
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