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세포생리학실험_cell culture, Genomic DNA Isolation_genomic DNA 추출, total RNA 추출, 전기영동2025.01.131. 세포 배양 HEK 293T 세포를 DMEM 배지와 FBS를 사용하여 배양하였다. 세포는 처음에는 동글동글한 모양이었지만 점차 바닥에 붙어 자라나면서 별모양의 형태를 띠었다. 배지의 색이 점점 노란색으로 변하면서 세포가 죽기 시작하였다. 이를 통해 세포가 일정 횟수의 분열을 한 후 노화되는 과정을 관찰할 수 있었다. 2. Genomic DNA 추출 HEK293T 세포에서 genomic DNA를 추출하였다. 세포를 용해시킨 후 단백질과 RNA를 제거하는 과정을 거쳐 순수한 DNA를 분리하였다. 전기영동 결과 DNA 밴드가 마커보다...2025.01.13
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전기영동을 이용한 단백질의 관찰(생화학실험)2025.01.161. 전기영동 전기영동은 전극 사이의 전기장 하에서 용액 속의 전하가 반대 전하의 전극을 향하여 이동하는 화학현상이다. 겔 전기영동법은 전기영동 현상을 단백질 분석에 응용한 초기 형태로, 단백질 크기에 따라 분리가 가능하다. 전기영동 실험에서는 SDS 처리를 통해 단백질의 전하를 균일하게 만들어 오직 크기에 따른 분리가 이루어지도록 한다. 또한 isoelectric focusing과 2D 전기영동법 등 다양한 전기영동 기법이 있다. 2. 겔 제조 겔은 acrylamide와 bisacrylamide를 혼합하여 중합 반응을 통해 만든다...2025.01.16
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10_PAGE를 이용한 단백질 검정 보고서2025.01.181. 단백질의 구조와 기능 단백질은 수백에서 수만 개의 아미노산으로 이루어진 중합체이다. 아미노산은 아미노기와 카복실기를 가지고 있는 단량체로, 곁사슬의 성질에 따라 소수성, 친수성, 염기성, 산성 등으로 구분된다. 단백질은 1차, 2차, 3차, 4차 구조를 가지며, 이러한 구조에 따라 다양한 기능을 수행한다. 단백질은 효소, 구조 단백질, 운동 단백질, 신호 단백질, 수용체 단백질, 수송 단백질, 방어 단백질, 저장 단백질 등 다양한 종류가 있다. 2. 단백질 합성 과정 단백질 합성은 mRNA, 리보솜, tRNA를 이용하여 이루어...2025.01.18
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단백질의 다양한 종류와 기능2025.01.181. 단백질의 다양한 종류와 기능 이번 활동을 통해 단백질의 다양한 종류와 기능, 1~4차 단백질 구조에 대한 기본적인 내용을 알게 되었습니다. 또한 전하를 띤 물질을 분리하는 전기영동 실험 방법과 원리를 배웠습니다. 실험을 직접 수행하면서 간과 근육 시료의 단백질 분리 결과를 관찰하고, 기관별 세포 유전자 발현의 차이를 이해할 수 있었습니다. 추가로 전기영동에 영향을 미치는 요인들에 대해서도 배웠습니다. 1. 단백질의 다양한 종류와 기능 단백질은 생명체에 필수적인 거대 분자로, 다양한 종류와 기능을 가지고 있습니다. 단백질은 아미...2025.01.18
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[A]서강대학교 현대생물학실험2_1차 풀레포트_PCR과 Agarose gel electrophoresis and gel purification2025.01.181. Basic Laboratory Techniques 배지는 세포 배양을 위한 필요물질이 들어있는 것으로 LB broth와 LB agar plate를 이용한다. 수용성 세포를 형질전환 하고 선택배지로 제조된 LB agar plate를 이용해 생성된 colony로 형질전환 효율을 계산한다. 2. Competent Cell 수용성 세포(Competent cell)란, 외부의 DNA를 수용할 수 있는 상태의 박테리아로, 자연적으로 유도될 수 있지만 본 실험에서는 Ca2+ 용액 처리와 냉각과 열 충격을 주어 인위적으로 유도한다. 3. P...2025.01.18
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식물 세포의 DNA 추출 및 전기 영동2025.01.171. DNA 추출 식물 세포의 DNA를 추출하는 과정을 설명하였습니다. 세포벽, 세포막, 핵막을 파괴하고 DNA와 결합한 단백질을 제거하는 과정을 거쳤습니다. 세제와 소금을 이용하여 세포막과 핵막을 융해하고, 에탄올을 사용하여 DNA를 분리하는 방법을 사용하였습니다. 2. 전기 영동 추출한 DNA를 이용하여 전기 영동 실험을 진행하였습니다. 전기장 내에서 DNA가 크기와 전하에 따라 이동하는 원리를 설명하였습니다. 1X TAE 버퍼, 6X 로딩 버퍼, DNA 래더 등을 사용하여 DNA 밴드를 관찰할 수 있었습니다. 전압 조절에 따른...2025.01.17
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PCR 결과 확인(전기영동)2025.01.181. PCR(Polymerase Chain Reaction) PCR(polymerase chain reaction)법은 DNA 또는 RNA의 특정영역을 시험관 내에 대량으로 증폭하는 기술이다. PCR은 Denaturation, Primer Annealing, Strand Extension의 세 가지 단계로 이루어지며 세단계가 한번 반복될 때마다 처음 양의 2배로 DNA 양이 증폭된다. PCR에 사용되는 중합효소는 Taq 1 polymerase로 이것은 Thermus aquaticus로부터 추출한 효소이다. PCR 반응 산물은 seq...2025.01.18
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PCR 기반 Specific Human DNA 증폭 및 검출 결과 보고서2025.01.151. PCR 기반 Specific Human DNA 증폭 및 검출 이 보고서는 PCR 기술을 사용하여 특정 인간 DNA를 증폭하고 검출하는 실험 결과를 설명합니다. 실험에서는 구강 상피 세포에서 DNA를 추출하고, 특정 프라이머를 사용하여 DNA를 증폭한 후 전기영동을 통해 분석했습니다. 실험 결과, 두 개의 샘플에서 250bp 부근에서 강한 발현이 관찰되었으며, 이 중 하나는 wild type, 다른 하나는 mutant type의 DNA인 것으로 확인되었습니다. 이 실험을 통해 PCR의 기본 원리와 UV-transilluminat...2025.01.15
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DNA 제한효소2025.01.151. 제한효소 제한효소는 세균이 박테리오파지의 공격을 받으면 생산하는 효소로 이중 나선의 DNA의 특정한 염기서열을 인식해 그 부분의 절단에 있어 촉매작용을 하는 효소이다. 대부분의 제한효소는 인식자리(recognition site) 또는 제한 자리(restriction site)라는 특정한 염기서열이 있는 자리에서 DNA를 절단한다. 제한효소는 회문이라는 양 사슬의 5'부터 3' 방향으로 똑같은 서열을 가진 DNA의 부위를 인식해 작용한다. 제한효소가 DNA를 절단하면 이중 가닥 중 한 가닥이 돌출된 형태를 띠는데 이를 점착 말단...2025.01.15
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생명과학실험1 SDS-PAGE & Coomassie blue Staining2025.01.131. SDS의 역할 및 원리 SDS(sodium dodecyl sulfate)는 계면활성제의 일종으로 단백질이나 핵산의 구조를 깨뜨려 선형으로 만들어주는 역할을 한다. 아미노산의 소수성 부분과 hydrophobic interaction을 하며 결합하는데, 아미노산 2개당 1개 정도 binding하여 단백질을 변성한다. 2. Gel에 들어가는 시료의 역할 ① Tris-HCl: Stacking gel과 Resolving gel의 pH를 다르게 하여 각 gel에서 Glycine의 charge 다르게 조정해준다. 또한 Cl-를 첨가해주어서...2025.01.13
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