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세포배양, DNA, RNA 추출 실험2025.11.141. 세포배양 (Cell Culture) 세포배양은 자연환경 외부의 통제된 조건에서 세포가 성장하는 과정이다. HEK 293T cell은 부착성 세포로 plate 바닥에 붙어 자라며, 계대배양을 통해 세포를 유지한다. Trypsin-EDTA를 사용하여 세포를 분리하고, 배지를 교체하며 세포를 배양한다. 세포는 초기 3일간 지연기를 거친 후 증식을 시작하여 plate를 채우고, 영양분 부족으로 정상기에 도달한 후 사멸기에 진입한다. 2. Genomic DNA 추출 (gDNA Isolation) Genomic DNA 추출은 세포용해, ...2025.11.14
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RNA 추출 및 정량 실험 결과보고서2025.11.111. RNA 추출 방법 Trizol, phenol, GITC를 이용한 homogenization으로 시작하여 chloroform을 통한 phase separation, isopropanol을 이용한 RNA 침전, 75% EtOH를 이용한 세척 과정을 거친다. Trizol은 산성 phenol로 단백질과 지질을 분해하고 GITC는 RNase를 억제한다. Chloroform은 유기용매로 phenol을 유기층으로 분리시키며, 원심분리를 통해 aqueous phase(RNA), interphase(DNA), organic phase(단백질,...2025.11.11
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RNA 추출 실험: 원리, 방법 및 순도 분석2025.11.171. RNA 추출 원리 및 중심원리 DNA의 유전정보는 DNA → RNA → 단백질 순서로 전달되는 중심원리(Central Dogma)를 따른다. DNA의 정보가 RNA로 전달되는 과정을 전사(transcription), RNA에서 단백질이 합성되는 과정을 번역(translation)이라 한다. RNA 획득은 유전자 발현의 양상과 메커니즘 연구에 필수적이며, cDNA 제작 및 RT-PCR 등의 실험 수행을 위해 필요하다. RNA는 DNA와 유사한 물리화학적 성질을 가지며, 세포 분쇄, 단백질 분해 제거, RNA 농축 및 검정 순서를...2025.11.17
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RNA 추출 실험: Guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform 방법2025.11.171. RNA 추출 방법 및 원리 생물 샘플에서 RNA를 추출하기 위해 phase separation을 이용한 Guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction method를 사용했다. 옥수수 잎 조직을 액체질소로 급속 냉각하여 분쇄한 후 Tri-RNA reagent를 첨가하여 세포를 용해시킨다. Chloroform을 첨가하여 원심분리하면 상층의 맑은 aqueous phase에 RNA가 분리되며, isopropanol로 침전시킨 후 70% ethanol로 세척하여 순수한 RNA를 얻는다. ...2025.11.17